Podstawy i techniki barwienia Kinyoun



The Barwienie Kinyoun Jest to technika barwienia stosowana do barwienia bakterii kwasoodpornych i kwaśnych pasożytów. Urodziło się z modyfikacji kolorystyki Ziehla-Neelsena; Obie techniki są interpretowane w ten sam sposób, ale różnią się dwoma elementami: w przygotowaniu głównego odczynnika iw tym, że technika Kinyoun nie używa ciepła.

Z tego powodu jest również znany jako zimne barwienie Ziehl-Neelsen lub Kinyoun na zimno. Jest wskazany do kolorowania Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, nietypowe mykobakterie, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris i Cyclosporas cayetanensis.

Warto wspomnieć, że Nocardias zabarwiają się słabo tą techniką, ponieważ są alkoholem częściowo kwasoodpornym, więc dla tego gatunku istnieje modyfikacja metodologii.

Z kolei zimną technikę Kinyoun połączono z techniką trichromu zmodyfikowaną przez Didiera w celu wykrywania kokcydii (Cryptosporidium parvum e Isospora belli) i zarodniki mikrosporidii (Enterocytozoon bieneusi i Encephalitozoon intestinalis).

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Technika
    • 2.1 Materiały
    • 2.2 Przygotowanie fuksyny z kinyounem
    • 2.3 Przygotowanie kwasu alkoholowego
    • 2.4 Przygotowanie barwnika kontrastowego z błękitem metylenowym
    • 2.5 Technika barwienia Kinyoun
    • 2.6 Specjalna technika Kinyoun dla Nocardias
    • 2.7 Połączona technika fuksyny fenolowej i trichromowej zmodyfikowana przez Didiera
    • 2.8 Kontrola jakości
  • 3 Technika Kinyoun w porównaniu z techniką Ziehla - Neelsen
  • 4 Odniesienie

Fundacja

Głównym odczynnikiem barwiącym jest fuksyna karbolowa lub fuksyna fenicada, która ma właściwości wiązania z kwasami karbolowymi występującymi w woskowej ścianie komórkowej, bogatej w lipidy (kwasy mikolowe) mykobakterii i niektórych pasożytów..

Tym związkom nie przeciwdziała odbarwianie kwasem; dlatego mikroorganizmy są zdefiniowane jako alkohol kwasoodporny.

W przeciwieństwie do techniki Ziehla-Neelsena - która utrwala barwnik przez ciepło - w technice Kinyouna ten krok nie jest konieczny, ponieważ fenolowy roztwór fuksyny przygotowany do tej techniki zawiera wysokie stężenie fenolu..

Fenol rozpuszcza materiał lipidowy ściany komórkowej, co pozwala na wprowadzenie barwnika fuksyny karbolu. Po wniknięciu barwnika pozostaje on nieruchomy pomimo mycia kwasem alkoholowym.

W ten sposób odporne na kwas mikroorganizmy nabierają charakterystycznego czerwonego koloru, podczas gdy wszystko, co nie jest alkoholem kwasoodpornym, staje się odbarwione i zabarwione na niebiesko..

Technika

Materiały

- Zmodyfikowana fuksyna fenolowa.

- Kwas alkoholowy.

- Błękit metylenowy.

Przygotowanie fuksyny finy Kinyoun

- Podstawowa fuksja: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Woda destylowana: 100 ml.

Podstawowa fuksyna w alkoholu musi być rozpuszczana powoli, stale mieszając. Następnie skrystalizowany fenol topi się w łaźni wodnej w 56 ° C. Po rozpuszczeniu dodać 8 ml do roztworu fuksyny przygotowanego powyżej.

Przygotowanie kwasu alkoholowego

- Stężony kwas solny: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Musi być mierzona, łączona i mieszana.

Wytwarzanie barwnika kontrastowego z błękitem metylenowym

- Błękit metylenowy: 0,3 g.

- Woda destylowana: 100 ml.

Jest ważony i rozpuszczany.

Technika bejcy kinyoun

1- Przygotuj rozmaz bezpośrednio z próbki, którą może być między innymi plwocina, płyn płucny, osad moczu, płyn mózgowo-rdzeniowy lub kał; lub z zawiesiny mikroorganizmów uzyskanych z czystych kolonii rozwiniętych w pierwotnych pożywkach hodowlanych.

2- Napraw rozmaz ciepłem.

3- Umieścić rozmaz na mostku barwiącym i przykryć przygotowanym odczynnikiem fenolowo-fuksynowym Kinyoun. Pozwól mu siedzieć przez 3 lub 5 minut.

4- Umyć wodą destylowaną.

5- Wybiel kwaśnym alkoholem przez 3 minuty i ponownie umyj wodą destylowaną.

6- Ponownie wybielamy kwaśnym alkoholem przez 1 lub 2 minuty, aż nie będzie już przeciągany barwnik.

7- Umyć wodą destylowaną i odcedzić, umieszczając szkiełko w pozycji pionowej.

8- Przykryj preparat błękitem metylenowym i pozostaw na 4 minuty.

9- Umyć wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.

10- Sprawdź w 40X, a następnie w 100X.

Jeśli chcesz poprawić i przyspieszyć barwienie mikroorganizmów kwasoodpornych, dodaj 1 kroplę środka zwilżającego (takiego jak tergitol nr 7) do 30 lub 40 ml fenolowej fuksyny Kinyoun..

Niektóre laboratoria zmieniają barwnik kontrastowy z błękitem metylenowym na kwas jasnozielony lub pikrynowy; pierwszy daje zielony kolor tła, a drugi generuje żółty kolor.

Specjalna technika Kinyoun dla Nocardias

Aby poprawić barwienie bakterii Nocardia, zastosowano modyfikację barwienia Kinyoun. Technika jest następująca:

1- Przykryj rozmaz fuksją kinyoun przez 3 minuty.

2- Umyć wodą destylowaną.

3- Krótko wybielamy 3% przygotowanym kwaśnym alkoholem, aż nie będzie już więcej barwnika.

4- Ponownie umyć wodą destylowaną.

5- Przykryć preparat błękitem metylenowym i pozostawić na 30 sekund.

6- Umyć wodą destylowaną i pozostawić do wyschnięcia na powietrzu.

Połączona technika fenolowej i trichromowej fuksyny zmodyfikowanej przez Didiera

Ta technika jest zalecana do analizy próbek kału w poszukiwaniu kokcydiów i zarodników Microsporidium sp w tym samym czasie Procedura, której należy przestrzegać, jest następująca:

1- Zakryj rozmaz fuksyną fenolową Kinyoun przez 10 minut.

2- Usunąć barwnik i umyć wodą destylowaną.

3- Wybielanie przez 30 sekund kwasem solnym z alkoholem.

4- Ponownie umyć wodą destylowaną.

5- Pokryj rozmaz roztworem trichromu przez 30 minut w temperaturze 37 ° C.

6- Umyć wodą destylowaną.

7- Odbarwiać przez 10 sekund alkoholowym kwasem octowym.

8- Wymyj wymaz przez 30 sekund przy użyciu 95% etanolu.

Kontrola jakości

Jako kontrolę pozytywną wymazy przygotowuje się przy użyciu szczepów Mycobacterium tuberculosis i barwione przygotowanymi odczynnikami w celu sprawdzenia, czy bakterie przybierają właściwy kolor (czerwono-fuksja).

Kontrole negatywne można również stosować przez przygotowywanie rozmazów za pomocą dowolnego szczepu, który nie jest alkoholem odpornym na kwasy, co potwierdza, że ​​cała próbka przybiera kolor kontrastu.

Technika Kinyoun w porównaniu do techniki Ziehla -Neelsen

Technika Kinyoun jest prostsza, ponieważ eliminuje etap ogrzewania, ale jego główną zaletą jest to, że zapobiega emisji oparów, wysoce toksycznych i powodujących raka w dłuższej perspektywie. Dlatego barwienie Kinyoun jest bezpieczniejsze dla personelu barwiącego.

Ważne jest, aby wziąć pod uwagę, że należy uważać, aby odczynniki nie miały bezpośredniego kontaktu ze skórą, ponieważ są one żrące, a wybielacz jest łatwopalny.

Jeśli chodzi o wady, negatywny rozmaz niekoniecznie oznacza, że ​​mikroorganizm nie jest obecny. Ponadto obecność detrytusu komórkowego może powodować fałszywie dodatnie wyniki, co powoduje zamieszanie w diagnozie.

Odniesienie

  1. Applied Clinical Chemistry (2016). Zestaw BK Kinyoun. Dostępny na: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Barwnik Kinyoun i dwie Kokcydia w HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
  5. Twórcy Wikipedii. „Kinyoun plama”. Wikipedia, wolna encyklopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 lutego 2018 r. Web. 5 stycznia 2019 r.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Wdrożenie techniki barwienia dla jednoczesnej diagnozy Coccidia i Microsporidia. Instytut Higieny Uniwersytetu Republiki. Montevideo. Urugwaj Dostępne pod adresem: higiene.edu.uy