Fundacja, przygotowanie i zastosowanie bulionu tetrationianowego



The bulion tetrationacyjny lub bulion TT jest selektywnym płynnym podłożem hodowlanym do wzbogacania i odzyskiwania szczepów Salmonella. Został stworzony przez Müellera, a później zmodyfikowany przez Kauffmanna, dlatego są tacy, którzy nazywają go bulionem Müeller-Kauffmann.

Pierwotna pożywka zawierała peptony proteozowe, węglan wapnia i tiosiarczan sodu. Kauffmann dodał sole żółciowe i stworzył inną modalność z jasnozielonym. Substancje te hamują wzrost bakterii z grupy coli, pozostawiając wolne podłoże do rozwoju bakterii chorobotwórczych, w tym przypadku Salmonella.

Modyfikacja była bardzo udana, ponieważ znacznie zwiększyła czułość medium. Dlatego jest on obecnie przydatny do poszukiwania Salmonellas w dowolnym typie próbki, ale zwłaszcza do stałych lub płynnych odchodów i żywności..

Jego przygotowanie składa się z dwóch faz; komercyjne podłoże jest podstawą do przygotowania bulionu tetrationianowego, a następnie, aby powstał tetrationian, dodawany jest jodowany roztwór jodu w celu uzupełnienia pożywki.

Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) zaleca stosowanie bulionu etylenowego uzupełnionego jasnozielonym w celu wzbogacenia próbek w poszukiwaniu Salmonelli, ponieważ jest bardziej selektywny niż bulion tetrationianowy i bulion seleninowy.

Ogólnie rzecz biorąc, bulion tetrationianowy jest idealny, gdy bakterie z rodzaju Salmonella są podejrzane w małych ilościach lub są nadużywane przez ekspozycję na substancje hamujące lub procesy przemysłowe, które minimalizują ich żywotność.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 - Tetrationian
    • 2.2 -Triathionate bulion Variante z jasnozielonym
  • 3 Użyj
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 zaleceń
  • 6 referencji

Fundacja

Obecne peptony odpowiadają trawiennym trzustkom kazeiny i trawieniu trawiennemu tkanki zwierzęcej. Stanowią one źródło węgla, azotu i składników odżywczych ogólnie dla rozwoju bakterii.

Ze swojej strony tiosiarczan sodu reaguje z jodowanym roztworem z wytworzeniem tetrationianu. Hamuje to wzrost bakterii z grupy coli i sprzyja rozwojowi bakterii zawierających enzym reduktazę tetrationianową, wśród nich jest rodzaj Salmonella, ale także Proteus.

Sole żółciowe działają również jako substancja hamująca większość bakterii Gram-dodatnich i niektóre bakterie Gram-ujemne (bakterie z grupy coli).

Węglan wapnia pochłania substancje toksyczne powstające w wyniku rozkładu tetrationianu, który tworzy kwas siarkowy. W tym sensie węglan wapnia neutralizuje kwasowość, utrzymując pH stabilnego podłoża.

W przypadku jasnozielonej modalności, substancja ta zwiększa selektywną moc bulionu tetrationianu przez hamowanie innych mikroorganizmów innych niż rodzaj Salmonella..

Przygotowanie

-Bulion tetrationacyjny

Jodowy roztwór jodu

Zważ:

  • 6 gramów jodu.
  • 5 g jodku potasu.

Jodek potasu rozpuszcza się w około 5 ml sterylnej wody destylowanej, a następnie jod jest dodawany stopniowo po podgrzaniu mieszaniny. Po całkowitym rozpuszczeniu wypełnia się jałową wodą destylowaną, aż osiągnie końcową objętość 20 ml.

Połowa bazy dla bulionu tetrationowego

Odważ 46 gramów odwodnionej pożywki i zawieś w 1 litrze sterylnej wody destylowanej. Mieszaj i podgrzewaj aż do całkowitego rozpuszczenia, może gotować się tylko przez kilka minut. Nie sterylizuj w autoklawie. Podstawę podłoża pozostawia się do ochłodzenia do około 45 ° C i w tym czasie dodaje się 20 ml jodowanego roztworu..

Po dodaniu roztworu jodurada do podłoża powinna być natychmiast zużyta. Jeśli nie chcesz korzystać z całej mieszaniny, wykonaj następujące czynności:

10 ml podłoża podstawowego rozprowadza się w probówkach i tylko 0,2 ml jodowanego roztworu dodaje się do probówek, które mają być zaszczepione próbkami..

Te, które nie będą używane, można nadal przechowywać w lodówce, jednak ponieważ medium nie jest sterylizowane, idealnym rozwiązaniem jest przygotowanie dokładnej wymaganej ilości..

Barwa podłoża przed dodaniem jodowanego roztworu jodu jest mlecznobiała z białym osadem i po dodaniu jest brązowa z gęstym osadem. Obserwowany osad jest normalny i odpowiada węglanowi wapnia, który się nie rozpuszcza. Końcowe pH pożywki wynosi 8,4 ± 0,2.

-Odmiana bulionu Tetrathionate z jasnozielonym

W celu przygotowania bulionu tetrationianowego o jasnozielonym zabarwieniu przeprowadza się wszystkie opisane powyżej etapy, ale dodatkowo do mieszaniny dodaje się 10 ml jasnozielonego roztworu przygotowanego w 0,1%..

Jasny zielony

To rozwiązanie jest przygotowane w następujący sposób:

Odważyć 0,1 g jasnozielonego i zawiesić w 100 ml wody destylowanej. Ogrzewać do wrzenia, aby osiągnąć całkowite rozpuszczenie. Zapisz w bursztynowej butelce.

Użyj

W przypadku próbek stolca (kultura stolca) protokół jest następujący:

Zaszczepić 1 g stałego kału lub 1 ml płynnego stolca w probówce z 10 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Wstrząsać energicznie i inkubować w aerobiozie w temperaturze 43 ° C przez 6-24 godzin.

Następnie pobrać porcję 10 do 20 μl bulionu i podhodować ją w pożywce selektywnej dla Salmonella, takiej jak agar SS, agar XLD, jasnozielony agar, agar jelitowy Hektoen, między innymi..

Równolegle, podłoża selektywne dla Salmonella powinny być zaszczepione bezpośrednią próbką (kał) bez wzbogacania. W przypadku próbek wymazów z odbytu pobrać materiał zebrany w probówce i postępować zgodnie z powyższym opisem.

W przypadku próbek żywności zważyć 10 g stałego pokarmu lub 10 ml płynnej żywności i zaszczepić butelkę 100 ml gotowego do użycia bulionu tetrationianowego. Postępuj w taki sam sposób, jak opisano powyżej, ale inkubuj w 37 ° C.

Jak widać, związek między próbką a bulionem będzie zawsze wynosił 1:10.

Kontrola jakości

W celu przetestowania pożywki hodowlanej można zastosować znane szczepy kontrolne. Najczęściej używane są certyfikowane szczepy ATCC.

Szczepy do użycia to Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

W przypadku szczepów Salmonella oczekuje się doskonałego rozwoju Escherichia coli może mieć słaby lub regularny rozwój, a szczepy Gram-dodatnie (Enterococcus i Staphylococcus) są częściowo lub całkowicie zahamowane.

Zalecenia

-Ponieważ podłoże to nie hamuje wzrostu Proteus, niektóre laboratoria stosują 40 mg / l nowobiocyny, aby zapobiec rozwojowi tego szczepu mikrobiologicznego. Antybiotyk należy dodać przed jodowanym roztworem jodu.

-Po przygotowaniu pożywki zawierającej jodowany roztwór jodu, nie powinno być więcej niż 2 godziny po zaszczepieniu.

-W momencie rozprowadzenia pożywki w probówkach mieszaninę należy homogenizować w sposób ciągły, aby ponownie zawiesić powstały osad.

-W mniej zanieczyszczonych próbkach bulion tetrationianowy inkubuje się w temperaturze 35–37 ° C, aw wysoce zanieczyszczonych próbkach zaleca się inkubację w temperaturze 43 ° C..

Referencje

  1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Baza bulionu tetrationianowego według Müellera-Kauffmanna. Dostępne w:
  2. Laboratoria BD 2003. Baza Tetrathionate Broth. Dostępne w:
  3. Laboratories Britania. 2015. Baza bulionu tionionowego. Dostępne w:
  4. Media BBL. 2005. Preparaty rurkowe do uprawy gatunków Salmonella.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porównanie pożywek hodowlanych z seleninem sodu i tetrationianem sodu, oba inkubowane w 37 ° C i 42 ° C przez izolacja Salmonella spp taborety. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220