Podstawa, przygotowanie i zastosowanie bulionu soi tripticaseína



The bulion sojowy tripticaseína Jest to płynna pożywka hodowlana, bardzo pożywna i nieselektywna. Ze względu na swoją wszechstronność jest jednym z najczęściej stosowanych płynnych nośników kultury w laboratorium mikrobiologicznym.

Znany jest również jako rosół tripticasa soja lub strawiona kazeina-soja, której skrót brzmi TSB dla jego akronimu w języku angielskim Jestem tryptykiem Rosół lub CST na akronim w języku hiszpańskim. Jego zastosowania są bardzo zróżnicowane ze względu na jego skład. Składa się z tryptyny, peptonu sojowego, chlorku sodu, fosforanu dipotasu i glukozy.

Jest zdolny do reprodukcji ważnych klinicznie bakterii chorobotwórczych, w tym bakterii wymagających pokarmu i bakterii beztlenowych. Niektóre oportunistyczne grzyby i zanieczyszczenia mogą również rozwijać się w tym środowisku.

Ze względu na wysoką moc odżywczą ma wysoką czułość wykrywania zanieczyszczeń mikrobiologicznych, z tego powodu został wybrany przez Służbę Inspekcji Zdrowia Zwierząt i Roślin USDA do analizy mikrobiologicznej szczepionek..

Podobnie, zupa tryptykazowa sojowa spełnia wymagania różnych farmakopei (europejski EP, japoński JP i północnoamerykański USP) do badań mikrobiologicznych produktów na poziomie przemysłowym, takich jak kosmetyki i żywność.

Z drugiej strony warto wspomnieć, że pomimo swojej dużej użyteczności medium to jest stosunkowo niedrogie, więc jest dostępne dla większości laboratoriów mikrobiologicznych. Jest również bardzo łatwy do przygotowania.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 Soja tryptozaminowa
    • 2.2-Warianty bulionu sojowego tryptykazyny
  • 3 Użyj
  • 4 Nasiona
  • 5 Kontrola jakości
  • 6 Ograniczenia
  • 7 referencji

Fundacja

Tripteina, pepton i glukoza dostarczają mu niezbędnych właściwości odżywczych, aby przekształcić go w idealne medium do szybkiego rozwoju mikrobiologicznego.

W większości mikroorganizmów można już zaobserwować około 6 do 8 godzin inkubacji. Istnieją jednak wolno rosnące szczepy, które mogą rosnąć przez wiele dni.

Chlorek sodu i fosforan dipotasu działają odpowiednio jako równowaga osmotyczna i regulator pH. O obecności wzrostu świadczy pojawienie się zmętnienia w podłożu; jeśli nie ma wzrostu, medium pozostaje przezroczyste.

Ze względu na jego jasny kolor możliwe jest obserwowanie produkcji pigmentów, takich jak ten pokazany na obrazku umieszczonym na początku artykułu, który odpowiada pigmentowi wytwarzanemu przez Pseudomonas aeruginosa. 

Przygotowanie

-Tryptyczny bulion sojowy

Aby przygotować bulion sojowy z tryptykazą, należy ważyć 30 gramów odwodnionego podłoża handlowego na skalę cyfrową. Następnie rozpuszcza się w litrze wody destylowanej zawartej w fioli.

Mieszaninę pozostawia się do odstania na 5 minut, a następnie doprowadza do źródła ciepła, aby wspomóc rozpuszczanie się ośrodka. Należy go często wstrząsać podczas gotowania przez 1 minutę.

Po rozpuszczeniu rozprowadza się go w probówkach o odpowiedniej wielkości, w zależności od potrzeb. Można stosować tuby z bawełnianą zatyczką lub bakelitowymi kapslami. Następnie probówki sterylizuje się za pomocą pożywki w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut.

PH pożywki powinno wynosić 7,3 ± 0,2

Należy wziąć pod uwagę, że kolor odwodnionej pożywki hodowlanej jest jasnobeżowy i powinien być przechowywany w temperaturze 10 do 35 ° C, w suchym miejscu. Przygotowany bulion jest jasnobursztynowy i powinien być przechowywany w lodówce (2 do 8 ° C).

-Odmiany bulionu sojowego tryptykazyny

Bulion sojowy modyfikowany tryptycaminą można przygotować przez dodanie soli żółciowych i nowobiocyny w celu selektywnego wyodrębnienia E. coli. Inną opcją do tego samego celu jest przygotowanie bulionu sojowego z tryptykazą uzupełnionego wankomycyną, cefiksymem i tellurynem (2,5 μg / ml).

Z drugiej strony można dodać więcej glukozy (0,25%) do bulionu trypticasein sojowego, gdy celem jest stymulowanie tworzenia biofilmu.

Użyj

Jest wystarczająco odżywczy, aby umożliwić rozwój wymagających lub irytujących bakterii, takich jak Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp i Brucella sp, nie ma potrzeby uzupełniania krwi lub surowicy.

Podobnie niektóre grzyby mogą rozwijać się w tym bulionie, na przykład Kompleks Candida albicans, Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Ponadto, pożywka ta w warunkach beztlenowych jest idealna do odzyskiwania bakterii należących do rodzaju Clostridium, jak również beztlenowych bakterii nie sporulujących o znaczeniu klinicznym..

W przypadku dodania 6,5% chlorku sodu można zastosować do wzrostu Enterococcus i innych paciorkowców grupy D..

Na poziomie badawczym jest bardzo przydatny w różnych protokołach, zwłaszcza w badaniach bakterii, które tworzą biofilmy lub biofilmy. Jest także wykorzystywany do przygotowania zawiesiny bakteryjnej w 0,5% Mac Farland niezbędnej do wykonania antybiogramu metodą Kirby'ego i Bauera.

W tym przypadku pobiera się 3 do 5 kolonii o podobnym wyglądzie i emulguje w 4-5 ml bulionu sojowego trypticazyny. Następnie inkubuje się przez 2 do 6 godzin w temperaturze 35-37 ° C, a następnie dostosowuje do żądanego stężenia za pomocą jałowej soli fizjologicznej. Bulionów sojowych Trypticase nie należy stosować przez 18 do 24 godzin inkubacji.

Zasiane

Próbkę można wysiać bezpośrednio lub hodować czyste kolonie pobrane z pożywek selekcyjnych. Inokulum powinno być małe, aby nie zamglić podłoża przed inkubacją.

Zazwyczaj inkubuje się w aerobiozie w 37 ° C przez 24 godziny, ale te warunki mogą się różnić w zależności od poszukiwanego mikroorganizmu. W razie potrzeby może być również inkubowany w warunkach beztlenowych w 37 ° C przez kilka dni. Na przykład u wymagających lub wolno rosnących mikroorganizmów można inkubować do 7 dni.

W analizie mikrobiologicznej substancji farmaceutycznych, takich jak szczepionki, protokoły są bardziej rygorystyczne. W takich przypadkach bulion bez wzrostu nie jest odrzucany, dopóki nie osiągnie 14 dni ciągłej inkubacji.

Kontrola jakości

Dla każdej przygotowanej partii 1 lub 2 probówki powinny być inkubowane bez inokulacji w celu wykazania sterylności. Musi pozostać niezmieniony.

Można również sadzić znane szczepy, aby ocenić ich zachowanie. Wśród szczepów, które można zastosować, są:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 lub 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający w warunkach atmosfery i temperatury odpowiedniej dla każdego mikroorganizmu.

Ograniczenia

-Fermentacja glukozy powoduje obniżenie pH podłoża przez wytwarzanie kwasów. Może to być niekorzystne dla przetrwania niektórych mikroorganizmów wrażliwych na kwasowość.

-Nie jest zalecany do konserwacji szczepów, ponieważ oprócz kwasowości bakterie po kilku dniach wyczerpują składniki odżywcze, co powoduje gromadzenie się substancji toksycznych, które powodują, że środowisko jest niegościnne.

-Należy dbać o wszystkie protokoły sterylności, ponieważ buliony są łatwo zanieczyszczone.

-Po przygotowaniu bulionu sojowego tryptykazyny nie próbuj przenosić bulionu do innej sterylnej probówki, ponieważ tego typu manewry są bardzo podatne na zanieczyszczenie.

Referencje

  1. Cona E. Warunki dobrego badania wrażliwości na podstawie testu dyfuzji agaru. Rev. Chil. infectol 2002; 19 (2): 77-81. Dostępne pod adresem: scielo.org
  2. British Laboratory Bulion z soi tryteinowej. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  3. Laboratorium MCD. Bulion sojowy Trytica. Dostępne pod adresem: electronic-systems.com
  4. Neogenowe laboratorium. Tryptyk Rosół Sojowy. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Ocena techniki immunoseparacji magnetycznej do odzyskiwania Escherichia coli O157: H7 w kremach mlecznych. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Dostępne pod adresem: scielo.org.ve
  7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Tworzenie biofilmu w izolowanych Staphylococcus aureus w zależności od wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe i pochodzenia klinicznego. Vitae 2015; 62 (1): 1-8. Dostępne pod adresem: saber.ucv.ve
  8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolacja Escherichia coli O157: H7 w próbkach kału bydła o podwójnym przeznaczeniu z gminy Miranda, stan Zulia, Wenezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Dostępne pod adresem: scielo.org