Fundacja, przygotowanie i zastosowanie bulionu z selenitu

The bulion seleninowy Jest selektywnym płynnym podłożem hodowlanym. Został zaprojektowany przez Leifsona do wzbogacania próbek, w których podejrzewa się obecność bakterii enteropatogennych z rodzaju Salmonella..

Medium to spełnia wymagania Amerykańskiego Stowarzyszenia Zdrowia Publicznego (APHA) i dlatego jest akceptowane do badania obecności Salmonelli w próbkach kału, moczu, płynnej lub stałej żywności, wodzie, między innymi..

Skład chemiczny, który posiada, sprzyja odzyskiwaniu tych mikroorganizmów, a tym samym hamuje rozwój innych. Jest głównie toksyczny dla większości bakterii należących do rodziny Enterobacteriaceae. Jednak pozwala także na odzyskanie szczepów Shigella i nie hamuje wzrostu Pseudomonas i Proteus..

Składa się z bezwodnego wodorotlenku sodu, bezwodnego fosforanu sodu, peptonów i laktozy. Istnieje również wariant, do którego dodawana jest cystyna, stąd jej nazwa bulion selenitowo-cystynowy.

Obecnie korzystne jest stosowanie bulionu seleninowo-cystynowego, ponieważ uzyskuje się wyższy procent odzysku Salmonelli, równoważny temu obserwowanemu dla innych selektywnych pożywek o tym samym celu, takich jak bulion sodowy Tetrathionate..

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 - Selena
  • 2.2-Przygotowanie medium komercyjnego
  • 2.3 Wariant bulionu selenitowo-cystynowego
• 3 zastosowania
• 4 Nasiona
• 5 Kontrola jakości
• 6 Ograniczenia
• 7 referencji

Fundacja

Peptony zawarte w bulionie służą jako składniki odżywcze dla prawidłowego rozwoju mikroorganizmów. Szczepy Salmonella wykorzystują peptony jako źródło azotu, witamin i aminokwasów.

Laktoza jest węglowodanem ulegającym fermentacji, podczas gdy selenin sodu jest substancją hamującą, która spowalnia wzrost bakterii Gram-dodatnich i większości bakterii obecnych w florze jelitowej, zwłaszcza rodziny Enterobacteriaceae. Fosforan sodu jest buforem stabilizującym pH pożywki.

W przypadku wariantu bulionu seleninowego zawierającego L-cystynę ten dodatkowy związek jest środkiem redukującym, który minimalizuje toksyczność selenitu, zwiększając odzysk Salmonelli.

Przygotowanie

-Bulion Selenitowy

Jeśli masz składniki mieszanki, możesz ważyć:

4 gramy bezwodnego wodorotlenku sodu.

10 g bezwodnego fosforanu sodu.

5 gr peptonów.

4 gramy laktozy.

Rozpuścić związki w 1 litrze sterylnej wody destylowanej. Może być lekko podgrzewany, aby rozpuścić się w całości.

Niektóre laboratoria narażają medium na 10 minut w płynnej parze, aby go wysterylizować, ponieważ autoklaw nie powinien być używany. Jeśli medium jest sterylizowane, można je przechowywać w lodówce, dopóki nie zostanie użyte.

Można go również przygotować bez sterylizacji i podawania bezpośrednio do sterylnych probówek 10–15 ml.

W takim przypadku należy pozostawić go do odpoczynku i natychmiast użyć. Ponieważ podłoże nie jest sterylne, nie można go przechowywać w lodówce do późniejszego użycia.

-Przygotowanie nośnika komercyjnego

Jeśli dostępna jest komercyjna pożywka, 23 g odwodnionej pożywki waży się i rozpuszcza w jednym litrze sterylnej wody destylowanej. Ogrzej krótko, aby zakończyć rozpuszczanie. Nie sterylizuj w autoklawie. Podawać aseptycznie 10 lub 15 ml w sterylnych probówkach.

Końcowe pH pożywki powinno wynosić 7,0 ± 0,2.

Należy zauważyć, że kolor odwodnionego medium jest beżowy, a preparat jest przezroczysty i półprzezroczysty.

Odmiana bulionu selenitowo-cystynowego

Zawiera te same związki z bulionu seleninowego, ale dodaje się 10 mg cystyny. Reszta procedury jest dokładnie taka sama jak opisano powyżej.

Używa

Ta pożywka jest szczególnie przydatna w badaniach epidemiologicznych, w przypadkach, gdy choroba nie jest w ostrym stadium, pacjenci bezobjawowi lub zdrowi nosiciele.

Izolacja rodzaju Salmonella jest zwykle trudna, ponieważ zazwyczaj zanieczyszczają one próbki w skąpy sposób. Bycie w małych ilościach łatwo pokrywa się z rozwojem innych rodzajów bakterii, które występują w większej ilości.

Z drugiej strony, surowiec, z którym przetwarzana jest przetworzona żywność, jest często narażony na ciepło, procesy odwodnienia, stosowanie środków dezynfekujących, promieniowania i konserwantów, między innymi..

Dlatego też Salmonellas obecne w surowcu są źle traktowane przez przedłożenie produktu do wyżej wymienionych procesów przemysłowych. Podobnie w przypadku próbek klinicznych, takich jak odchody, szczepy mogą być słabe, jeśli pochodzą od pacjentów, którzy byli leczeni antybiotykami..

Dlatego każda próbka, w której podejrzewa się obecność Salmonelli, musi zostać wstępnie wzbogacona w bulionie laktozowym, a następnie wzbogacona w bulion seleninowy, aby zoptymalizować jego odzysk w pożywce selektywnej, takiej jak agar SS, agar z ksylozą, dezoksycholan lizyny (XLD) ), między innymi dojelitowy agar Hektoen (HE) i zielono-jasny agar.

Zasiane

W przypadku próbek kału pobrać 1 g próbki i zawiesić w probówce z 10 do 15 ml bulionu seleninowego. Jeśli stolec jest płynny, należy wziąć 1 ml i zawiesić w bulionie. W przypadku wymazów z odbytnicy wylej materiał wymazowy do bulionu.

W próbkach pokarmów stałych należy pobrać 1 g i zawiesić w bulionie seleninowym.

W płynnej żywności mieszać w równych częściach z bulionem seleninowym w podwójnym stężeniu.

W przypadku wirowania próbek moczu odrzucić supernatant, zebrać cały osad i zawiesić go w bulionie seleninowym.

Buliony inkubuje się w 37 ° C przez 24 godziny inkubacji. Wzrost bakterii świadczy o zmętnieniu. Dodatkowa probówka na próbkę może być również włączona w celu inkubacji w 42 ° C. Następnie wysiać selektywne podłoża stałe z bulionu seleninowego.

Kontrola jakości

Aby kontrolować sterylność, bulion seleninowy z każdej partii bez szczepienia inkubuje się w 37 ° C przez 24 godziny. Oczekuje się, że nie ma zmętnienia ani zmiany koloru podłoża.

Aby kontrolować dobre funkcjonowanie pożywki, można stosować znane szczepy, takie jak:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 i Proteus mirabilis ATCC 43071.

Oczekiwane wyniki to:

• W przypadku pierwszych trzech szczepów bakterii wzrost musi być zadowalający.
• Do Escherichia coli częściowe zahamowanie.
• Dla Proteus umiarkowany wzrost.

Ograniczenia

Średni bulion seleninowy jest toksyczny dla ludzkiej skóry, dlatego należy unikać bezpośredniego kontaktu.

Referencje

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Porównanie pożywek hodowlanych z seleninem sodu i tetrationianem sodu, oba inkubowane w 37 ° C i 42 ° C przez izolacja Salmonella taborety taborety przewoźników. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Laboratories Britania. Selenito Caldo. 2015. Dostępny na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Bulion Selenito Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto-Valela Z, Hernández-Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiologiczna izolacja Salmonella spp. i narzędzia molekularne do jego wykrywania. Zdrowie, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Dostępne na stronie: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.