Fundacja bulionu EC, przygotowanie i zastosowania

The Bulion EC lub rosół Escherichia coli Jest selektywnym płynnym podłożem hodowlanym. Podłoże to jest zalecane przez Standardowe Metody do liczenia bakterii coli ogółem i kałowych, techniką najbardziej prawdopodobnej liczby (NMP) w próbkach wody i żywności, gdzie głównym zaangażowanym czynnikiem jest Escherichia coli.

Bulion EC składa się z tryptyny, laktozy, soli żółciowych, fosforanu dipotasowego, fosforanu monopotasowego, chlorku sodu i wody. Jego formuła została opracowana strategicznie, aby sprzyjać wzrostowi bakterii coli typu całkowitego i kałowego oraz zapobiegać rozwojowi innych towarzyszących mikroorganizmów.

Bakteria Escherichia coli jest główną bakterią coli w kale obecną jako zanieczyszczenie w wodzie i źródłach pokarmu, powodując ważne zaburzenia żołądkowo-jelitowe.

Należy zauważyć, że istnieje wiele serotypów Escherchia coli; wśród nich możemy wymienić enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropatogenne (EPEC), enterotoksygeniczne (ETEC) i enteroaggregative (EAEC).

Oznacza to zdolność do rozwoju wszystkich z nich, ale bez możliwości ich rozróżnienia. W tym celu należy przeprowadzić dodatkowe testy.

Badanie mikrobiologiczne wody i żywności według najbardziej prawdopodobnej liczby (NMP) w poszukiwaniu bakterii coli typu coli i kałowych jest protokołem zgodnym z kilkoma fazami; faza wstępna, faza potwierdzenia i faza zakończenia. Bulion EC jest używany w fazie potwierdzenia.

Indeks

• 1 Fundacja
  • 1.1 Bulion EC
  • Bulion 1,2 EC modyfikowany nowobiocyną
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 bulion EC
  • Bulion 2,2 EC modyfikowany nowobiocyną
• 3 Użyj
  • 3.1 Analiza bakterii grupy coli całkowitej i kałowej
• 4 Kontrola jakości
• 5 zaleceń
• 6 referencji

Fundacja

Bulion EC

Podłoże EC opiera się na dostarczeniu niezbędnych składników odżywczych dla optymalnego rozwoju bakterii coli typu coli i kałowych, w których bakteria jest zawarta Escherichia coli.

Te składniki odżywcze są dostarczane przez tryptynę, będąc doskonałym źródłem peptydów i aminokwasów. Ponadto zawiera również laktozę, węglowodan ulegający fermentacji, który zapewnia energię i pozwala pokazać, czy bakterie wytwarzają gaz.

Z drugiej strony, pożywka zawiera sole żółciowe, które zapewniają selektywny charakter, ponieważ hamuje wzrost drobnoustrojów Gram-dodatnich, które mogą być obecne w próbce..

Podobnie fosforan dipotasowy i fosforan monopotasowy działają jako system równoważenia pH. System ten jest konieczny, ponieważ laktoza zawarta w bulionie ma tendencję do zakwaszania medium, gdy jest fermentowane przez mikroorganizmy, ale jest to kompensowane przez sole fosforanowe.

Dlatego te pierwiastki są niezbędne, ponieważ niekontrolowana kwasowość może wpływać na prawidłowy rozwój poszukiwanych mikroorganizmów.

Ze swojej strony chlorek sodu stabilizuje osmotycznie medium, podczas gdy woda jest rozpuszczalnikiem obecnych substancji rozpuszczonych i zapewnia płynną konsystencję pożywce.

Bulion EC zmodyfikowany nowobiocyną

Okrend i Rose stworzyli różne buliony EC, zwane bulionem EC modyfikowane nowobiocyną. Modyfikacja polegała na zmniejszeniu stężenia soli żółciowych i dodaniu 20 mg / dl nowobiocyny.

Ta modyfikacja sprzyja odzyskiwaniu szczepów Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Ten serotyp bakteryjny powoduje ciężkie krwotoczne zapalenie okrężnicy, które może powodować zespół hemolityczno-mocznicowy (HUS); co z kolei może powodować ostrą niewydolność nerek, z wysoką śmiertelnością, która może osiągnąć nawet 50% u osób starszych.

Ze względu na zachorowalność i śmiertelność powodowaną corocznie przez tę bakterię z powodu spożycia skażonej żywności, Departament Rolnictwa Stanów Zjednoczonych (USDA) szeroko zaleca stosowanie tego środka.

Przygotowanie

Bulion EC

Odważyć 37,4 gr odwodnionego podłoża i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Mieszankę należy pozostawić na 5 minut. Następnie w źródle ciepła rozpuszcza się często.

Po rozpuszczeniu jest rozprowadzany w probówkach testowych uprzednio wyposażonych w rurkę Durhama. Sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut.

PH pożywki powinno wynosić 6,9 ± 0,2. Kolor odwodnionego podłoża jest beżowy i przygotowany jest jasnobursztynowy.

Wina są przechowywane w lodówce, dopóki nie zostaną użyte. W momencie użycia buliony muszą mieć temperaturę pokojową.

Z drugiej strony bulion EC można również przygotować w podwójnym stężeniu.

Bulion EC zmodyfikowany nowobiocyną

Odważyć 36,7 gr odwodnionego podłoża i rozpuścić w 1 litrze wody. Reszta preparatu jest taka sama jak opisana powyżej.

Użyj

Analiza bakterii coli ogółem i kałowych

Bulion EC jest idealny do fazy potwierdzającej badania bakterii z grupy coli metodą NMP, zarówno w próbkach wody, jak i produktach farmaceutycznych i żywności.

Leniwe mętne i gazowe buliony otrzymane w fazie wstępnej powinny być ponownie umieszczone w 2% jasnozielonej żółci i bulionie EC.

W przypadku bakterii z grupy coli buliony EC inkubuje się w aerobiozie przez 24–48 godzin w temperaturze 37 ° C, aw przypadku bakterii coli z kałem inkubuje się w aerobiozie przez 24–48 godzin w temperaturze 44 ° C.

W obu przypadkach jest to interpretowane w następujący sposób: mętne rury z produkcją gazu są uważane za dodatnie. Jeśli nie ma wytwarzania gazu w ciągu 24 godzin, inkubacja jest kontynuowana do 48 godzin.

Buliony EC dodatnie przechodzą do pełnej fazy potwierdzającej, która polega na ponownym posiewie w pożywkach selektywnych, takich jak agar Mac Conkey, agar EMB lub agar Endo..

Jeśli użyty bulion jest zmodyfikowany przez EC nowobiocyną, zaleca się ponowne użycie probówek dodatnich na agarze Mac Conkey z sorbitolem.

Kontrola jakości

Kontrola jakości musi być przeprowadzana na każdej partii przygotowanego podłoża. Po pierwsze, należy ocenić sterylność medium. W tym sensie jeden lub dwa buliony inkubuje się bez zaszczepiania w aerobiozie przez 24 godziny w 37 ° C. Oczekiwanym wynikiem jest przezroczysty bulion, bez zmętnienia lub zmiany koloru.

Po drugie, należy ocenić wzrost znanych szczepów, dla których można użyć następujących bakterii: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju mikrobiologicznego, obserwując mętny bulion z wytwarzaniem gazu E. coli i bez gazu dla Salmonelli.

Inne szczepy, które można włączyć do kontroli, to: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Szczepy te muszą być całkowicie zahamowane.

Zalecenia

-Umieszczenie rur Durhama jest niezbędne do badania bakterii z grupy coli.

-Przed sterylizacją rozprowadzić medium w probówkach, nigdy potem.

-Nie używać, jeśli medium ma ponad 3 miesiące przygotowania.

-Nie używaj, jeśli występują jakiekolwiek zmiany w typowych cechach nośnika.

Referencje

1. Laboratories Britania. EC Medium. 2015. Dostępny na: britanialab.com
2. E. coli enterohemorrhagic. Centrum bezpieczeństwa żywności i zdrowia publicznego. 2010. Dostępny pod adresem: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Średni EC. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Neogen Pożywka EC modyfikowana nowobiocyną. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Wykrywanie, izolacja i charakterystyka Escherichia coli producent toksyny Shiga ze świeżo mielonej wołowiny ze sklepów mięsnych w Concepción, prowincja Tucumán. Rev Microgol przez Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Dostępne na: www.scielo.org.