Bulion laktozado, preparat i zastosowania

The bulion laktozowy jest płynnym, nieselektywnym podłożem hodowlanym, stosowanym głównie jako pożywka wstępnego wzbogacania w izolacji szczepów Salmonella z analizy mikrobiologicznej przeprowadzonej na przetworzonej żywności, produktach mlecznych lub wodzie. Jest to zalecane przez Międzynarodową Komisję ds. Specyfikacji Mikrobiologicznych Żywności (ICMPF).

Medium zawiera enzymatyczne trawienie żelatyny, ekstraktu mięsnego i laktozy, substancji niezbędnych do rozwoju bakterii. Ponadto laktoza jest węglowodanem ulegającym fermentacji, więc niektóre bakterie z grupy coli są w stanie rozdzielić ją przy produkcji gazu.

Z tego powodu bulion laktozowy jest zalecany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) do wstępnego badania bakterii coli typu coli i kałowego, kwalifikując go jako doskonałą alternatywę dla zastąpienia laurylosiarczanowego bulionu tryptozowego standardową techniką Most Likely Number (NMP). ), stosowany do analizy mikrobiologicznej próbek żywności, mleka i wód powierzchniowych, odpadów podziemnych, rekreacyjnych, domowych i przemysłowych.

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
• 3 zastosowania
  • 3.1 Wzbogacanie wstępne
  • 3.2 Analiza bakterii grupy coli całkowitej i kałowej
• 4 Kontrola jakości medium
• 5 referencji

Fundacja

W przypadku analizy mikrobiologicznej niektórych próbek etap wstępnego wzbogacania jest niezbędny do odzyskania określonego mikroorganizmu, który może być w bardzo małej ilości lub w niekorzystnych warunkach, które naruszają lub minimalizują jego żywotność.

Tak jest w przypadku suchej i przetworzonej żywności, ewentualnie zanieczyszczonej Salmonellas sp. W tych przypadkach, jeśli bakterie są obecne, doznały fizycznego i chemicznego złego traktowania podczas procesu produkcyjnego produktu..

W taki sposób mikroorganizmy są narażone na niekorzystne czynniki, takie jak odwodnienie, ekspozycja na produkty hamujące lub toksyczne, a także na nakładanie się generowane przez obecność innych bakterii w większej ilości, między innymi..

W tym sensie bulion laktozowy działa naprawczo na uszkodzone struktury mikroorganizmu, powodując jego regenerację i reprodukcję w taki sposób, że można go wykryć.

Podobnie bulion laktozowy ma zdolność rozcieńczania substancji hamujących, które mogą wpływać na jego żywotność, umożliwiając jego rozwój. Ponadto skład odżywczy bulionu laktozowego ma strategiczne znaczenie dla wzrostu Salmonella sp powyżej innych mikroorganizmów.

W celu ostatecznej identyfikacji musi być podhodowana w kierunku innych środków upraw ostatecznych.

Z drugiej strony skład pożywki umożliwia także wykrywanie mikroorganizmów fermentujących laktozę, które wytwarzają gaz.

Przygotowanie

Aby przygotować 1 litr bulionu laktozowego, odważ 13 g odwodnionego podłoża i rozpuść w 1000 ml wody destylowanej.

Aby pomóc w rozpuszczeniu medium w wodzie, możesz trochę podgrzać roztwór, ale nie za dużo..

Po jednorodności roztwór przygotowuje się w następujący sposób: jeśli bulion jest używany do poszukiwania bakterii z grupy coli, przygotowuje się stojak z probówkami i wkłada do góry nogami rurkę fermentacyjną Durham.

Rura Durhama jest bardzo ważnym szczegółem, ponieważ pozwoli wykryć powstawanie gazu, cennych danych w poszukiwaniu bakterii z grupy coli.

Gdy probówki są gotowe, dozuje się do nich 10 ml bulionu laktozowego, który musi wystarczyć na pokrycie całej probówki Durham..

Jeśli bulion laktozowy ma być użyty jako bulion wstępnego wzbogacania, nie jest konieczne umieszczanie probówki fermentacyjnej Durham. W takim przypadku wymagana jest większa ilość medium (225 ml), która będzie podawana w butelkach o pojemności 500 ml, z szerokimi ustami iz termoodporną zakrętką.

Następnie probówki lub kolby przenosi się do autoklawu w 121 ° C na 15 minut.

Pożywka powinna pozostać przy końcowym pH 6,9 ± 0,2 w 25 ° C.

Wina są przechowywane w lodówce, dopóki nie zostaną użyte.

Przed użyciem buliony muszą być hartowane w temperaturze pokojowej.

Z drugiej strony bulion laktozowy można również przygotować w podwójnym stężeniu.

Niektóre laboratoria dodają purpurę bromokrezolową do bulionu laktozowego jako wskaźnik pH, aby pokazać probówki, w których nastąpiła fermentacja laktozy przez zmianę koloru. W tym przypadku bulion ma purpurowy kolor i jeśli fermentacja żółknie.

Używa

W laboratoriach mikrobiologicznych laktoza bulionu jest szeroko stosowana jako stosunkowo niedrogi nośnik, który oferuje niezawodne i szybkie wyniki (24-48 godzin).

Może być stosowany do analizy bakterii coli ogółem i kałowych w wodzie i żywności lub jako bulion wstępnego wzbogacania Salmonelli.

Wzbogacanie wstępne

Wzbogacanie wstępne jest etapem poprzedzającym wzbogacenie próbki, co znacznie poprawia odzyskiwanie bakterii z rodzaju Salmonella w przetworzonej żywności.

W tym celu próbkę stałego pokarmu (25 gramów) lub płynu (25 ml) wysiano w 225 ml bulionu laktozowego i inkubowano przez 24 do 48 godzin. Następnie bulion seleninowo-cystynowy lub bulion tetrationianowy będzie hodowany w wzbogaconej pożywce. Następnie przechodzi do mediów selektywnych XLD i SS.

Analiza bakterii coli ogółem i kałowych

Jest doskonałym środkiem jako wskaźnik zanieczyszczenia kałowego.

Dlatego bulion laktozowy jest idealny do przypuszczalnej fazy badania bakterii coli za pomocą metody najbardziej prawdopodobnej liczby.

W przypadku próbek, w których podejrzewa się dużą ilość bakterii grupy coli, zaszczepi się mniejszą ilość bakterii grupy coli (1 ml), natomiast w przypadku próbek, w których podejrzewa się mniejszą liczbę bakterii grupy coli, zaszczepia się więcej objętości próbek (10 ml)..

Przygotowano 10 rozcieńczeń do analizy^-1, 10^-2, 10^-3, formowanie 3-5 tubowej baterii dla każdego stosowanego stężenia.

Z każdego rozcieńczenia tę samą objętość wysiewa się do bulionów laktozowych.

Probówki inkubuje się przez 24 godziny. Negatywne buliony inkubuje się jeszcze przez 24 godziny.

Interpretacja wyników jest dokonywana poprzez obserwację dwóch cech: pierwsza to obecność lub brak zmętnienia, a ponieważ to medium nie zawiera wskaźnika pH, nie będzie zmiany koloru.

Drugi to produkcja gazu lub nie. Gaz można łatwo zademonstrować w rurze Durham poprzez pojawienie się jednego lub więcej pęcherzyków powietrza wewnątrz.

Uznaje się za dodatnie, jeśli obserwuje się obie cechy, to jest zmętnienie przy produkcji gazu. Pozytywne probówki należy ponownie wysiać w pożywkach potwierdzających (bulion Brilliant Green 2% Bile i EC bulion).

Kontrola jakości medium

- W przygotowaniu medium ważne jest, aby nie zapomnieć o umieszczeniu probówek Durhamsa, jeśli celem tego samego jest badanie bakterii z grupy coli.

- Nie przegrzewać medium przed sterylizacją.

- Przed sterylizacją rozprowadzaj w probówkach, nigdy potem.

- Nie używać, jeśli medium ma ponad 3 miesiące przygotowania.

- Nie używaj, jeśli zauważysz jakąkolwiek zmianę w typowych cechach nośnika.

- Przygotowując partię bulionu laktozowego, przetestuj jego jakość, sadząc szczepy znane jako Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii i Klebsiella pneumoniae. Rosną bardzo dobrze, przy produkcji gazu (kontrola pozytywna).

- Może również obejmować Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis, które dobrze rosną, ale bez produkcji gazu (kontrola negatywna).

- Należy zauważyć, że pierwotny kolor odwodnionego podłoża jest beżowy, a pożywki przygotowanej bardzo przezroczysty i przezroczysty żółty. W przypadku zmiany koloru lub wyglądu może nastąpić pogorszenie tego samego.

Referencje

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologia i mikrobiologia środowiskowa. (2013) I edycja. Uniwersytet w Cartagenas, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M., Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. (2009). Techniki analizy mikrobiologicznej żywności. 2nd ed. Wydział Chemii, UNAM. Meksyk.
3. Laboratoria Conda Pronadisa. 2017. Podwójne stężenie bulionu laktozowego (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Porównanie technik ekstrakcji bakterii coli z osadów jeziora Xochimilco, Meksyk. Rev. Argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Dostępne pod adresem: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Określenie jakości mikrobiologicznej wód studni artezyjskich okręgów departamentów gminy Central, Cordillera i Capital. Mem. Inst. Investig. Cienc. Zdrowie 2013; 11 (1): 5-14. Dostępne od: scielo.iics.