Fundament, przygotowanie i zastosowanie Vogel-Johnson Agar



The Agar Vogel-Johnsona jest stałą, selektywną i zróżnicowaną pożywką hodowlaną, specjalnie opracowaną do izolacji Staphylococcus aureus. Podłoże to zostało stworzone przez Vogela i Johnsona w 1960 r. Z modyfikacji agaru tellurynowego glicyny sformułowanego w 1955 r. Przez Zebovitza, Evansa i Niven.

Modyfikacja polegała na zwiększeniu stężenia mannitolu obecnego w podłożu i wprowadzeniu wskaźnika pH. Obecna formuła składa się z tryptyny, ekstraktu drożdżowego, mannitolu, fosforanu dipotasowego, chlorku litu, glicyny, czerwieni fenolowej, agaru, 1% roztworu telluranu potasu i wody.

Należy zauważyć, że istnieją inne środki, które, podobnie jak agar Vogel-Johnsona, są selektywne dla izolacji S. aureus, takie jak solony agar mannitol i agar Baird Parker. W tym sensie można powiedzieć, że podstawą agaru Vogel-Johnsona jest mieszanina słonego agaru mannitolowego i agaru Bairda Parkera..

W pierwszej kolonie S. aureus Wyróżnia się je fermentując mannitol i zmieniając wskaźnik pH na żółty. Z drugiej strony, w drugim S. aureus charakteryzuje się redukcją telluru do telluru i tworzeniem szarych do czarnych kolonii. Obie właściwości obserwuje się na agarze Vogel-Johnsona.

To medium, podobnie jak jego odpowiedniki, jest przydatne do wykrywania Staphylococcus aureus w próbkach żywności, kontrolach sanitarnych produktów przemysłowych iw próbkach klinicznych.

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Wkład składników odżywczych
    • 1.2 Moc selektywna
    • 1.3 Moc różnicowa
    • 1.4 Równowaga osmotyczna i środek zestalający
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 1% wag./obj. Roztwór telluru potasowego
    • 2.2 Podłoże agarowe Vogel-Johnsona
  • 3 Użyj
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 referencji

Fundacja

Wkład składników odżywczych

Podłoże Vogel-Johnson zawiera tryptynę i ekstrakt drożdżowy; obie substancje zapewniają długołańcuchowe aminokwasy, które służą jako źródła węgla i azotu niezbędne do rozwoju bakterii. Bakterie zdolne do wzrostu w tym podłożu będą pobierać składniki odżywcze z tych substancji.

Moc selektywna

Agar Vogel-Johnsona jest w stanie zahamować wzrost bakterii Gram-ujemnych, a nawet niektórych bakterii Gram-dodatnich, sprzyjając rozwojowi gronkowców koagulazo-dodatnich. Substancjami hamującymi są telluryn potasu, chlorek litu i glicyna.

Moc różnicowa

Substancje, które tworzą to zróżnicowane podłoże, to mannitol i telluryn potasu. Mannitol jest węglowodanem, a gdy jest fermentowany, wytwarzane są kwasy, które zmieniają medium z czerwonego na żółte, co dzieje się dzięki obecności czerwonego wskaźnika pH fenolu.

Natomiast bezbarwny tellur, po zredukowaniu do metalicznego wolnego tellurku, przybiera kolor ciemnoszary do czarnego.

The Staphylococcus aureus fermentuje mannitol i redukuje tellur do telluru. Dlatego typowe kolonie S. aureus w tym medium są szare lub czarne otoczone żółtym środkiem.

Bakterie, które rosną w tym podłożu i nie redukują tellurytu ani fermentującego mannitolu, utworzą przezroczyste kolonie otoczone czerwonym podłożem, nawet bardziej intensywnym niż oryginalny kolor, ze względu na alkalizację podłoża za pomocą peptonów..

Z drugiej strony bakterie, które redukują telluryt, ale nie fermentują mannitolu, będą rosły jako szare lub czarne kolonie otoczone głębokim czerwonym kolorem.

Jeśli podłoże przygotowano bez dodatku tellurynu potasowego, kolonie S. aureus rozwinęłyby się jako żółte kolonie otoczone żółtym środkiem, takim jak słony agar mannitol.

Równowaga osmotyczna i środek zestalający

Fosforan dipotasowy utrzymuje równowagę osmotyczną pożywki i dostosowuje pH do neutralności 7.2. Podczas gdy agar daje stałą konsystencję pożywce hodowlanej.

Przygotowanie

1% roztwór telluranu potasu w / v

Ten roztwór nie jest zawarty w odwodnionym medium, ponieważ nie można go sterylizować w autoklawie. Z tego powodu jest przygotowywany oddzielnie i dodawany do sterylizowanego medium.

Niektóre domy handlowe sprzedają gotowy do użycia 1% roztwór telluru potasowego. Jeśli chcesz przygotować się w laboratorium, wykonaj następujące czynności:

Odważyć 1,0 g telluryn potasu i odmierzyć 100 ml wody destylowanej. Rozpuść telluryn potasu w części wody, a następnie uzupełnij ilość wody, aż osiągniesz 100 ml. Sterylizować roztwór metodą filtracji.

Podłoże agarowe Vogel-Johnson

Odważ 60 g odwodnionego podłoża i rozpuść w 1 litrze wody destylowanej. Mieszaninę ogrzewa się do wrzenia, aby pomóc w całkowitym rozpuszczeniu. Podczas procesu rozpuszczania medium jest często mieszane.

Sterylizować w autoklawie pod ciśnieniem 15 funtów i 121 ° C przez 15 minut. Wyjąć z autoklawu i odstawić, aż medium osiągnie temperaturę około 45–50 ° C. Dodaj 20 ml uprzednio przygotowanego roztworu telluru potasu do 1%.

Wymieszać i wlać do sterylnych płytek Petriego. Pozostawić do zestalenia i uporządkować odwrócone w plaquers do późniejszego przechowywania w lodówce do momentu użycia.

Końcowe pH przygotowanego podłoża powinno wynosić 7,2 ± 0,2.

Przed posadzeniem próbki poczekaj, aż płyta osiągnie temperaturę otoczenia.

Kolor przygotowanego medium jest czerwony.

Użyj

Chociaż można go użyć do izolacji S. aureus w każdym rodzaju próbek jest on najczęściej używany do analizy mikrobiologicznej produktów farmaceutycznych, kosmetyków i żywności.

Zaleca się, aby inokulum było gęste. Siew można przeprowadzić poprzez prążkowanie za pomocą uchwytu platynowego lub powierzchni za pomocą szpatułki Drigalskiego.

Płytki inkubuje się w 35-37 ° C przez 24 do 48 godzin w aerobiozie.

Kontrola jakości

Aby przeprowadzić kontrolę jakości podłoża Vogel-Johnson, można użyć następujących szczepów kontrolnych:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 lub Proteus mirabilis ATCC 43071.

Oczekiwany wynik jest następujący: dla szczepów S. aureus Zadowalający wzrost z czarnymi koloniami otoczonymi żółtym medium. Do S. epidermidis regularny wzrost z przezroczystymi lub czarnymi koloniami otoczonymi czerwonym medium.

Podobnie dla E. coli oczekuje się, że nastąpi całkowite zahamowanie i za Proteus mirabilis częściowe lub całkowite zahamowanie; jeśli będzie rosnąć, zrobi to oszczędnie, a kolonie będą czarne w średnim czerwonym kolorze.

Referencje

  1. Laboratoria BD. VJ (Vogel i Johnson Agar). 2006. Dostępny pod adresem: bd.com
  2. Laboratories Britania. Vogel- Johnson Agar. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  3. Laboratories Britania. Telluryn potasu. 2015. Dostępny na: britania.com
  4. Laboratorium Himedia. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Dostępny pod adresem: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Baza Vogel-Johnson Agar. Merck Microbiology Manual. Wydanie 12, str. 502-503. Dostępne w: Użytkownicy / Zespół / Pliki do pobrania
  6. Współpracownicy Wikipedii, „Ágar Vogel Jonhson”, Wikipédia do encyklopedycznego livre,   disponível em: wikipedia.org.
  7. Wenezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Jedzenie Izolacja i liczenie Staphylococcus aureus. Dostępne w:sencamer.gob.ve