Jasnozielone podłoże agarowe, przygotowanie i zastosowanie



The jasny zielony agar jest to stała pożywka hodowlana o wysokim stopniu selektywności. Stosuje się go wyłącznie do izolacji szczepów z rodzaju Salmonella, jednak istnieją pewne wyjątki, takie jak gatunki typhi i paratyphi, które nie rosną w tym podłożu.

Poszukiwanie rodzaju Salmonella jest częste w próbkach kału, wody lub żywności. W tym sensie to medium może być bardzo przydatne. Agar ten został stworzony w 1925 roku przez Kristensena, Lestera i Jurgensa, później zmodyfikowany przez Kauffmanna.

Składa się z pluripeptonów z trawienia trawiennego tkanki zwierzęcej i trawienia kazeiny w trzustce, zawiera także ekstrakt drożdżowy, chlorek sodu, laktozę, sacharozę, czerwień fenolową, jasnozieloną i agar-agar.

Charakteryzuje się bycia dość surowe środowisko dla większości bakterii, promowanie rozwoju salmonelli, bakterii z grupy coli jednak niektóre z nich są w stanie przetrwać w nim rozwijać słabo.

Ważne jest, aby podkreślić, że w tym medium rodzaj Shigella nie rośnie i nie występuje Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Dlatego, jeśli pożądane jest wyizolowanie tych mikroorganizmów, należy zastosować inne środki, takie jak między innymi agar XLD..

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Jasnozielony agar
    • 1.2 Warianty jasnozielonego agaru (BGA)
  • 2 Przygotowanie
  • 3 Zastosowania / aplikacje
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 referencji

Fundacja

Jasny zielony agar

Każdy ze składników tworzących medium ma specyficzną funkcję, która określa właściwości i właściwości agaru.

Pluripeptonas i wyciąg z drożdży są źródłem składników odżywczych, z których mikroorganizmy pobierają azot i minerały niezbędne do ich rozwoju. Laktoza i sacharoza są źródłami energii dla mikroorganizmów zdolnych do ich fermentacji.

Jasnozielona jest substancją hamującą, która zapobiega rozwojowi bakterii Gram-dodatnich i dużej liczby drobnoustrojów Gram-ujemnych.

Chlorek sodu zapewnia stabilność osmotyczną pożywki. Podczas gdy czerwień fenolowa jest wskaźnikiem pH, zmienia kolor po wykryciu wytwarzania kwasów z fermentacji węglowodanów.

Niefermentujące kolonie laktozy i sacharozy rosną na tym podłożu w kolorze białym, różowym lub przezroczystym na czerwonym tle. Na przykład bakterie z rodzaju Salmonella.

Podczas gdy bakterie fermentujące laktozę lub sacharoza zdolna do wzrostu w tym podłożu, rozwijają się zielonkawożółte lub zielonkawożółte kolonie na żółto-zielonym tle. Na przykład, Escherichia coli i Klebsiella pneumoniae.

Warianty jasnozielonego agaru (BGA)

Istnieją inne warianty jasnozielonego agaru; nowobiocyna zielony agar jasna glukoza (NBG) i agar nowobiocynowy jasnozielony glicerol laktoza (NBGL).

Novobiocin agar bright green glucose (NBG)

Zawiera agar sojowy tryptozowy, cytrynian amonu żelazowego, pentahydrat tiosiarczanu sodu, czerwień fenolową, glukozę, jasnozielony, nowobiocynę i wodę destylowaną.

Służy do izolacji kolonii Salmonella z próbek kału.

W tym przypadku jasnozielona i nowobiocyna są substancjami hamującymi, które zapobiegają wzrostowi bakterii Gram-dodatnich i niektórych mikroorganizmów Gram-ujemnych.

Tiosiarczan sodu jest źródłem siarki, a cytrynian żelazowy jest źródłem żelaza, oba niezbędne do ujawnienia produkcji siarkowodoru poprzez tworzenie czarnego osadu siarczku żelazowego.

Glukoza jest węglowodanem ulegającym fermentacji, a czerwień fenolowa jest wskaźnikiem pH.

W tej pożywce kolonie Salmonella rozwijają się duże z czarnym środkiem otoczonym czerwonawym halo, a następnie wyraźnym widocznym obszarem. Niektóre szczepy Citrobacter freundii produkować kolonie identyczne z Salmonella.

Jasnozielony agar nowobiocynowy glicerol laktoza (NBGL)

Ta pożywka zawiera agarze sojowym Trypticase żelaza, cytrynian amonu, tiosiarczan sodu, laktoza, glicerol, zieleń brylantowa, nowobiocyny i wodę destylowaną.

Różnica między tym medium a poprzednim polega na tym, że glukoza jest zastępowana przez laktozę, a glicerol i czerwień fenolowa nie są używane.

Pożywka jest również używana do izolowania gatunków Salmonella, kolonie rozwijają się czarne dzięki produkcji siarkowodoru.

Tylko kolonie, które nie wytwarzają kwasu z glicerolu lub laktozy, osiągają produkcję H2Wystarczy, ponieważ niskie pH zakłóca tworzenie H2S. Powoduje to powstanie bezbarwnych kolonii dla większości gatunków Proteus i Citrobacter.

Przygotowanie

-Odważ 58 gramów otrzymanego w handlu odwodnionego podłoża. Dodaj go w litrze wody podwójnie destylowanej. Wymieszaj, odstaw na kilka minut i prześlij preparat do źródła ciepła, aż całkowicie się rozpuści.

-Autoklawować w temperaturze 121 ° C przez 15 minut, nie przekraczać czasu sterylizacji.

-Odstawić i podawać nawet gorące na sterylnych płytkach Petriego. Końcowe pH powinno wynosić 6,9 ± 0,2.

-Pozostawić do zestalenia i przechowywać w lodówce do momentu użycia. Przed posadzeniem płytki powinny mieć temperaturę pokojową.

-Medium proszkowe jest zielone i gotowe do uzyskania pomarańczowo-brązowego lub czerwono-zielonego koloru, w zależności od pH i domu handlowego. Bardzo brązowy kolor wskazuje na przegrzanie agaru.

-Po zestaleniu się agaru nie zaleca się ponownego formowania, ponieważ podłoże ulega pogorszeniu.

Zastosowania / aplikacje

Pożywka ta jest używana do wyszukiwania między innymi szczepów z rodzaju Salmonella z próbek stolca i produktów mlecznych..

Ponieważ jest to środowisko raczej niegościnne, zaleca się posadzenie obfitego inokulum, jeśli użyta zostanie próbka bezpośrednia. W przeciwnym razie przed sadzeniem w tym podłożu należy dokonać wstępnego wzbogacenia i wzbogacenia próbek.

Ponieważ niektóre szczepy Salmonella są hamowane lub rosną z trudem, wskazane jest, aby towarzyszyć temu podłożu z innymi selektywnymi agarami dla Salmonelli.

Cała kolonia z charakterystyczną Salmonellą musi zostać poddana testom biochemicznym w celu ostatecznej identyfikacji.

Kontrola jakości

Aby przetestować dobre funkcjonowanie jasnozielonego podłoża agarowego, szczepy ATCC można wykorzystać do obserwowania rozwoju tego samego na nim..

Najczęstszymi szczepami stosowanymi do kontroli jakości są: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Pierwsze 3 muszą dawać różowe lub przezroczyste białe kolonie na czerwonym tle. Salmonella o dobrym rozwoju i Proteus o rzadkim lub regularnym wzroście.

Oczekuje się, że Klebsiella i Escherichia mają żółtawo-żółte kolonie z żółtym tłem, aw przypadku Shigella i Staphylococcus powinny być zahamowane.

Odwodnione podłoże należy przechowywać w temperaturze pokojowej, w suchym miejscu, ponieważ podłoże jest bardzo higroskopijne.

Referencje

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratory S.A. Brilliant Green Agar. 2009
  2. British Laboratory Jasny zielony agar. 2015.
  3. Laboratorium BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial