Fundacja Agar Thayer Martin, przygotowanie i zastosowanie



The Agar Thayera Martina Jest to wysoce pożywne i selektywne podłoże stałe do izolacji Neisseria meningitidis i Neisseria gonorrhoeae; oba znane jako chorobotwórcze lub istotne klinicznie Neisseria.

Jedną z najważniejszych cech specjalnych agaru Thayer Martin jest jego wysoka zawartość suplementów diety. Ta właściwość jest niezbędna, ponieważ Neisserias są bardzo wymagającymi mikroorganizmami z żywieniowego punktu widzenia i dlatego nie rosną we wspólnych mediach.

Z drugiej strony, ponieważ te mikroorganizmy normalnie występują w obszarach niesterylnych, konieczne jest dodanie inhibitorów, które utrudniają wzrost towarzyszącej flory, bez wpływu na rozwój rodzaju Neisseria..

Agar ten składa się z agaru bazowego GC, hemoglobiny, dodatkowych suplementów odżywczych i kompleksu substancji hamujących (antybiotyków i środków przeciwgrzybiczych). Domy handlowe sprzedają każdy suplement osobno.

Próbka do posadzenia w tym podłożu będzie zależała od poszukiwanego mikroorganizmu. Do Neisseria rzeżączka Idealne próbki to wydzielina z pochwy i cewki moczowej. Podczas gdy dla Neisseria meningitidis najczęściej używanymi próbkami są płyny mózgowo-rdzeniowe, gardłowe i nosowo-gardłowe.

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Agar podstawowy GC
    • 1.2 Hemoglobina
    • 1.3 Dodatek wzbogacający
    • 1.4 Inhibitory
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 Oryginalny agar Thayer Martin
    • 2.2 Agar Thayer Martin zmodyfikowany
  • 3 Użyj
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 Ograniczenia
  • 6 referencji

Fundacja

Neisserias to mikroorganizmy sklasyfikowane jako uciążliwe i dlatego ich izolacja jest trudna. Z tego powodu Thayer Martín jest złożonym medium i każdy z jego składników spełnia funkcję, która jest wyjaśniona poniżej:

Agar rdzeniowy GC

Agar GC zawiera pepton proteozy, skrobię kukurydzianą, chlorek sodu, fosforan dipotasowy, fosforan monopotasowy i agar-agar. Jego składniki dostarczają podstawowych składników odżywczych do rozwoju drobnoustrojów, neutralizują toksyczne kwasy tłuszczowe, przyczyniają się do utrzymania równowagi osmotycznej, określają pH i zapewniają stałą konsystencję środowiska.

Hemoglobina

Hemoglobina dostarcza czynniki V i X (odpowiednio dinukleotyd nikotynamidoadeninowy NAD i hemin). Dlatego w tym środowisku rosną również gatunki Haemophilus. Hemoglobinę można uzyskać w handlu w postaci odwodnionej lub świeżą defibryfikowaną bydlęcą krew można dodać do pożywki.

Dodatek wzbogacający

Z drugiej strony, dodatek wzbogacający musi być dodany do podłoża Thayer-Martin, ponieważ składniki odżywcze zawarte w agarze bazowym nie są wystarczające dla wymagań rodzaju Neisseria..

Najczęściej stosowany suplement wzbogacający nazywa się isovitalex. Zawiera glutaminę, adeninę, NAD, kokarboksylazę, guaninę, azotan żelaza, kwas p-aminobenzoesowy, witaminę B12, tiaminę i glukozę. Wszystkie te związki są niezbędne do prawidłowego rozwoju chorobotwórczego Neisseria.

Inhibitory

Ponieważ jest to pożywka wysoce odżywcza, inhibitory muszą być stosowane, aby zapobiec wzrostowi mikroorganizmów zwykłej flory tego obszaru, a tym samym sprzyjać izolacji rodzaju Neisseria..

Kompleks inhibitorów składa się z wankomycyny, kolistyny ​​i nystatyny. Wankomycyna hamuje wzrost bakterii Gram-dodatnich, kolistyna zapobiega rozwojowi bakterii Gram-ujemnych, takich jak Pseudomonas i niektóre saprofityczne Neisseria, a nystatyna działa na drożdże, Candida albicans.

Jednakże zmodyfikowano agar Thayera Martina; zmiany polegały na dodaniu trimetoprimu, zwiększeniu ilości agaru i dodaniu dodatkowej glukozy. Zmiany te znacznie poprawiły odzysk gatunków Neisseria gonorrhoeae.

Należy zauważyć, że trimetoprim hamuje wzrost rodzaju Proteus i jego powstanie roju. W tym sensie antybiotyki zapewniają selektywną naturę średniej Thayer Martin.

Przygotowanie

Oryginalny agar Thayer Martin

-GC Agar

Odważyć 8,2 g odwodnionego podłoża GC i zawiesić w 100 ml. Mieszać i gotować przez 1 minutę z częstym mieszaniem, aby rozpuścić w całości. Sterylizować mieszaninę w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

-2% hemoglobiny

Zawiesić 2 g odwodnionej hemoglobiny w 2 lub 3 ml gorącej destylowanej wody, aby utworzyć jednolitą mieszaninę. Dodawaj trochę więcej wody, aby uzupełnić objętość 100 ml. Zawiesina musi być jednorodna przed sterylizacją.

Sterylizować w autoklawie przez 15 minut.

-Dodatek wzbogacający

Rekonstytuuj drogę handlową rozcieńczalnikiem dostarczonym przez ten sam dom handlowy. Dobrze wymieszać Ilość rozcieńczalnika do użycia zostanie podana w instrukcji zestawu..

-Suplement hamowania V.C.N (wankomycyna, kolistyna, nystatyna)

Rozpuścić fiolkę z rozcieńczalnikiem dostarczonym przez dom handlowy. Dobrze wymieszać Ilość rozcieńczalnika do użycia zostanie podana w instrukcji zestawu..

-Przygotowany

Na każde 100 ml agaru GC postępować w następujący sposób:

Gdy agar GC opuszcza autoklaw, pozwól ostygnąć do temperatury około 50 ° C i dodaj 2 ml przygotowanego roztworu hemoglobiny, 2 ml suplementu wzbogacającego (izobitalex lub britalex) i 2 ml suplementu hamującego. Wymieszać i podawać w sterylnych szalkach Petriego.

Pozostawić do zestalenia i przechowywać w lodówce do momentu użycia.

Kolor przygotowanego podłoża to wiśnia czerwona. Końcowe pH pożywki wynosi 7,2 ± 0,2

Zmodyfikowany agar Thayer Martin

Odważyć 8,2 g odwodnionego podłoża GC i zawiesić w 100 ml. Dodaj 1 g agaru i dodaj 0,3 g glukozy. Mieszać i gotować przez 1 minutę z częstym mieszaniem, aby rozpuścić w całości. Sterylizować mieszaninę w autoklawie w 121 ° C przez 15 minut.

Przygotuj suplement hemoglobiny i wzbogacania, jak opisano powyżej.

Stosowanym suplementem hamującym jest V.C.N.T (wankomycyna, kolistyna, nystatyna, trimetoprim).

-Przygotowany

Postępuj zgodnie z opisem dla oryginalnego agaru Thayer Martin.

Użyj

Agar Thayer Martin należy hartować przed wysiewem próbek. Powszechnie stosowanymi próbkami są wydzieliny z gardła, wydzieliny z nosa, wydzielina z pochwy, cewki moczowej i / lub odbytu oraz CSF..

Użyj świeżo pobranych próbek i zrób silną inokulę na agarze. Próbki są wysiewane bezpośrednio przez wyładowanie materiałowe, a następnie prążkowane przez zubożenie na powierzchni.

Płytki inkubuje się w 35-37 ° C przez 24 do 48 godzin w słoju mikroaerofilowym (5% CO2). Pod koniec okresu inkubacji płytki bada się pod kątem kolonii małych, szarych i czasami śluzowatych..

Wykonaj testy biochemiczne Grama i potwierdzające podejrzane kolonie.

Kontrola jakości

Aby przeprowadzić kontrolę jakości agaru Thayer Martin, można użyć następujących szczepów drobnoustrojów.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 i Neisseria meningitidis ATCC 13090; w obu szczepach oczekuje się zadowalającego rozwoju.

Należy również uwzględnić następujące szczepy: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 i Candida albicans ATCC 10231. We wszystkich z nich oczekuje się całkowitego lub częściowego zahamowania w tym podłożu.

Ograniczenia

-Należy pamiętać, że bakterie odporne na stosowane inhibitory mogą rosnąć w podłożu..

-Są szczepy Neisseria rzeżączka które mogą być wrażliwe na stężenie stosowanej wankomycyny. Z tego powodu zaleca się równoległe stosowanie agaru czekoladowego uzupełnionego izovitalexem, ale bez inhibitorów.

-Istnieją szczepy drożdży odporne na nystatynę, które mogą rosnąć w tej pożywce i zakłócać izolację patogennych Neisseria, zwłaszcza gonokoków..

Referencje

  1. Laboratoria diagnostyczne Valtek. Agar Thayer-Martin.2016. Dostępne w: com
  2. Laboratories Britania. Thayer Martin Modified Medium. 2010. Dostępny pod adresem: britanialab.com
  3. Twórcy Wikipedii. Agar Thayera-Martina. Wikipedia, wolna encyklopedia. 26 października 2017, 16:33 UTC. Dostępne na: wikipedia.org4. Dostęp 28 lutego 2019 r.
  4. Laboratories Britania. Agar GC. 2010. Dostępny pod adresem: britanialab.com.
  5. Laboratories BBL ™ Medium Enrichment dla szybkich mikroorganizmów. 1999. Dostępny w: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.