Podstawa, przygotowanie i zastosowanie Agar TCBS



The Agar TCBS jest wysoce selektywną i zróżnicowaną stałą pożywką hodowlaną, zwłaszcza do izolacji i hodowli bakterii Vibrio Vibrio cholerae, V. vulnificus i V. parahaemolyticus jako główne patogeny tego rodzaju.

Skrót TCBS oznacza sacharozę z cytrynianem tiosiarczanu. Ten agar jest również znany jako selektywne podłoże dla Vibrios. Pierwotna formuła została stworzona przez Nakanishi, a później zmodyfikowana przez Kobayashiego.

Składa się z ekstraktu drożdżowego, peptonu mięsnego, tryptyny, cytrynianu sodu, tiosiarczanu sodu, żółci wołowej, sacharozy, chlorku sodu, cytrynianu żelaza, błękitu bromotymolowego, błękitu tymolowego i agaru.

Kompozycja ta pozwala na odpowiedni rozwój gatunków Vibrio z wody, odchodów i próbek żywności; z wyjątkiem Vibrio hollisae, który nie rośnie w tym medium. Ponadto podłoże TCBS jest zdolne do hamowania wzrostu innych towarzyszących bakterii, zwłaszcza bakterii z grupy coli.

Ze względu na poważne problemy żołądkowo-jelitowe i pozajelitowe, które wytwarzają niektóre gatunki z rodzaju Vibrio, ich diagnoza jest bardzo ważna. Człowiek jest zainfekowany głównie przez spożywanie surowego lub niedogotowanego pokarmu morskiego lub zanieczyszczonej wody, ale także przez zakażenie ran.

Z tego powodu laboratoria kliniczne powinny włączyć agar TCBS do badania kultur stolca płynnych próbek kału, zwłaszcza z pojawieniem się wody ryżowej. Zwłaszcza jeśli pacjent zgłosił kontakt z wodą morską lub spożycie owoców morza lub ryb.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Przygotowanie
  • 3 Użyj
  • 4 Nasiona
  • 5 Ograniczenie
  • 6 Kontrola jakości
  • 7 referencji

Fundacja

Ekstrakt drożdżowy, peptony mięsne i tryptyna są źródłem odżywczym tego medium. Jednak agar TCBS jest niegościnnym medium dla większości bakterii.

Jego wysoką selektywność daje dodatek cytrynianu sodu i żółci wołowej; oba są środkami hamującymi, które również zapewniają alkaliczne pH pożywce, ograniczając wzrost towarzyszącej flory i sprzyjając wzrostowi V. cholerae, wśród innych gatunków. Należy zauważyć, że Vibrio cholerae jest bardzo wrażliwy na zgagę.

Ze swojej strony chlorek sodu równoważy osmotycznie z medium. Ponadto, ponieważ jego stężenie jest wysokie, działa również jako czynnik hamujący, sprzyjając wzrostowi bakterii halofilnych.

Sacharoza jest cukrem ulegającym fermentacji, który wraz z niebieskimi wskaźnikami pH bromotymolu i błękitu tymolowego nadaje pożywce charakter różnicowy. Z tego powodu dzięki temu możliwe jest odróżnienie szczepów fermentujących sacharozę od szczepów niefermentujących.

Kolonie szczepów fermentujących sacharozę nabierają żółtego koloru i zmieniają kolor z zielonego na żółty z powodu wytwarzania kwasów. Nie-fermentory stają się przezroczyste, a medium pozostaje oryginalnym kolorem (zielonym).

Podobnie, podłoże to zawiera tiosiarczan sodu jako źródło siarki i cytrynian żelaza jako środek ujawniający. Oba pokazują bakterie zdolne do produkcji siarkowodoru (bezbarwny gaz). H2S tworzy się z tiosiarczanu, a następnie reaguje z cytrynianem żelazowym, tworząc widoczne czarne osady.

Na koniec agar nadaje podłożu stałą konsystencję.

Przygotowanie

Odważ 89 g odwodnionego podłoża i rozpuść w jednym litrze wody destylowanej. Pomóż rozpuszczaniu przez ogrzewanie i częste mieszanie. Mieszaninę można gotować przez 2 minuty.

To medium nie autoklawuje. Po rozpuszczeniu podaje się go bezpośrednio na sterylne płytki. Po zestaleniu są one ułożone w odwrotny sposób u twórców płytki nazębnej i przechowywane w lodówce (2-8 ° C), dopóki nie zostaną użyte.

Po przygotowaniu podłoże powinno mieć pH 8,6 ± 0,2.

Barwa odwodnionego podłoża jest jasnobeżowa lub zielonkawo-beżowa, a kolor podłoża to las zielony lub niebieskozielony.

Ważne jest, aby pozostawić płytki do hartowania przed wysiewem próbek.

Użyj

Najczęstszą próbką izolacji Vibrios są stolce biegunkowe.

Próbki kału, jeśli nie mogą być wysiane natychmiast na selektywnym podłożu, muszą być transportowane w środku Cary Blair.

Aby zwiększyć czułość hodowli, kał można przepuszczać przez wodę peptonową o pH 8,4 jako pożywkę wzbogacającą przez maksymalnie 8 godzin, stamtąd jest on hodowany na podłożu TCBS..

Należy również pamiętać, że niektóre szczepy Vibrios mogą powodować posocznicę u pacjentów z obniżoną odpornością, dzięki czemu można je izolować z posiewów krwi. Podobnie, próbki wody i żywności z morza można analizować, gdy wybuchną epidemie choroby cholery.

Zasiane

Inokulum badanej próbki musi być widoczne, wysiew odbywa się metodą prążkowania przez wyczerpanie. Płytki inkubuje się w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Przypuszczalne kolonie Vibrio cholerae Są średniej wielkości, gładkie, nieprzezroczyste, mają cienkie krawędzie i żółte, ponieważ fermentują sacharozę..

W podobny sposób gatunek V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii i trochę V. vulnificus. Inne gatunki Vibrios ważne klinicznie jako V. parahaemolyticus nie fermentować sacharozy, rozwijając się w kolonie oliwkowozielone.

Z drugiej strony musimy pamiętać, że niektóre szczepy Aeromonas i Plesiomonas, które są oksydazą (+), mogą rosnąć w tej pożywce, rozwijając żółte kolonie, które mogą dezorientować lekarza. Podczas gdy niektóre szczepy Pseudomonas również oksydazy (+) rosną jako zielone kolonie, jak również V. parahaemolyticus.

Ograniczenie

Test oksydazy, który jest pozytywny dla rodzaju Vibrio, nigdy nie powinien być przeprowadzany z kolonii uzyskanych z agaru TCBS, ponieważ uzyskany wynik będzie fałszywie ujemny. Związki w ośrodku silnie zakłócają ten test. Dlatego należy to robić z subkultur na agarze z krwią.

Kontrola jakości

Aby udowodnić, że podłoże jest w dobrym stanie, zaleca się sadzić znane lub certyfikowane szczepy kontrolne i obserwować, czy wzrost spełnia oczekiwane cechy.

W tym celu:

-Vibrio cholerae - Zadowalający wzrost (żółte kolonie, przezroczysta granica).

-Vibrio parahaemolyticus - Zadowalający wzrost (kolonia z zielonym środkiem i półprzezroczystą granicą).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - zadowalający wzrost (żółte kolonie z aureolą tego samego koloru wokół kolonii).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - całkowite lub częściowe zahamowanie (małe żółte lub półprzezroczyste kolonie).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - hamowanie częściowe lub całkowite (kolonie niebieskie).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Całkowicie zablokowany.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Całkowite lub częściowe zahamowanie. (Mała, środkowa zielona półprzezroczysta krawędź).

Inkubacja niezaszczepionej pożywki nie powinna ulec zmianie.

Referencje

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar TCBS. 2009. Dostępny na: f-soria.es
  2. Laboratorium BD. BD. TCBS Agar 2003. Dostępny na: bd.com
  3. Laboratories Britania. Medium TCBS. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS Agar. 2016. Dostępny pod adresem: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.