Sojowy agar tripticaseína fundacja, przygotowanie i zastosowania

The agar sojowy trypticasein lub agar sojowy tryptozowy jest stałym, nieselektywnym i odżywczym podłożem hodowlanym. Jest oznaczony literami TSA dla jego akronimu w języku angielskim Trypticase Soy Agar. Składa się z tryptyny, peptonu sojowego, chlorku sodu i agaru.

Ze względu na wysoką moc odżywczą idealnie nadaje się do uprawy umiarkowanie wymagających i nie wymagających mikroorganizmów. Pożywka bez dodatkowych suplementów nie jest zalecana dla kultur pierwotnych, ale jest bardzo przydatna do subkultury czystych szczepów i utrzymania ich żywotności, między innymi.

Agar ten służy również jako podstawa do przygotowania wzbogaconych pożywek, takich jak agar z krwią, zwłaszcza gdy wymagane jest obserwowanie wzorów hemolizy i zamontowanie taksonów optoquiny i bacytracyny, wymaganych w diagnozie Streptococcus pneumoniae i Streptococcus pyogenes odpowiednio.

Z drugiej strony, w połączeniu z antybiotykami przydatne jest wyizolowanie fakultatywnych i ścisłych mikroorganizmów beztlenowych o znaczeniu klinicznym z próbek z mieszaną florą..

Wreszcie, skład agaru sojowego tryptykazyny i jego wydajności spełnia wymagania ustanowione przez różne farmakopei (europejskie, japońskie i północnoamerykańskie).

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 Płytki z agarem sojowym tryptykazyny
  • 2.2 Płytki z agarem sojowym tryptykazyny uzupełnione krwią
  • 2.3 Płytki z agarem sojowym tryptykazyny uzupełnione ogrzaną krwią
  • 2.4 Kliny agaru sojowego tryptykazyny
• 3 zastosowania
• 4 Nasiona
• 5 Kontrola jakości
  • 5.1 Kontrola sterylności
  • 5.2 Kontrola wzrostu
  • 5.3 Kontrola wzrostu i wzorca hemolizy agaru sojowego tryptykazyny uzupełnionej krwią
• 6 referencji

Fundacja

Dla prawidłowego rozwoju bakterii konieczna jest obecność wkładów energetycznych, takich jak aminokwasy, witaminy, zasady purynowe i pirymidyczne.

W tym sensie tryptyna i pepton sojowy dostarczają tych składników odżywczych mikroorganizmom, umożliwiając tym samym ich pełny rozwój. Jednak dla wymagających bakterii konieczne jest uzupełnienie tego agaru krwią odbarwioną lub podgrzaną krwią w celu zwiększenia jego wzbogacenia.

Z drugiej strony, jeśli antybiotyki zostaną dodane do pożywki, staje się ona podłożem selektywnym. Można również dodać 0,6% ekstraktu drożdżowego, aby ułatwić izolację gatunków z rodzaju Listeria, dodając jednocześnie telluryn cystyny i Idealna jest krew jagnięca Corynebacterium diphteriae.

Na koniec chlorek sodu nadaje równowagę osmotyczną pożywce, a agar zapewnia stałą konsystencję.

Przygotowanie

Płytki z agarem sojowym Tripticasein

Aby przygotować agar sojowy trypticasein, należy zważyć 40 gram odwodnionego podłoża handlowego w skali cyfrowej. Rozpuszcza się w litrze wody destylowanej zawartej w fioli.

Mieszaninę pozostawia się do odstania na 5 minut, a następnie doprowadza do źródła ciepła, aby wspomóc rozpuszczanie się ośrodka. Należy go często mieszać i gotować przez 1 lub 2 minuty. Następnie pożywkę sterylizuje się w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut.

Pozostawić do ostygnięcia do 50 ° C i rozprowadzić w sterylnych szalkach Petriego. Pozwól zestalić się, odwrócić, uporządkować w plecakach i przechowywać w lodówce.

Końcowe pH podłoża powinno wynosić 7,3 ± 0,2.

Należy wziąć pod uwagę, że kolor odwodnionej pożywki hodowlanej jest jasnobeżowy i powinien być przechowywany w temperaturze od 10 do 35 ° C, w suchym miejscu.

Ze swej strony przygotowany agar jest jasnobursztynowy. Przygotowane płytki należy przechowywać w lodówce (2 do 8 ° C) aż do użycia.

Przed użyciem płytki muszą osiągnąć temperaturę pokojową.

Płytki z agarem sojowym Tripticasein uzupełnione krwią

Agar z krwią przygotowuje się przez dodanie 5% rozwłóknionej krwi w czasie chłodzenia agaru sojowego trypticaseiny w 50 ° C. Mieszanina jest homogenizowana przez wirowanie z delikatnymi ruchami.

Podawać w sterylnych szalkach Petriego. Kolor medium powinien być czerwony wiśniowy.

Płytki z agarem sojowym Tripticasein uzupełnione podgrzaną krwią

W celu przygotowania agaru na bazie krwi na bazie TSA, procedury opisane powyżej są takie same, ale po opuszczeniu autoklawu pozostawia się do odstania aż temperatura medium będzie w przybliżeniu między 56 a 70 ° C. W tym czasie krew jest umieszczana i mieszana, aż medium stanie się brązowe.

Podawać w sterylnych szalkach Petriego. Kolor medium jest czekoladowo brązowy.

Kliny agaru sojowego tryptykazyny

Procedura przygotowania agaru jest taka sama jak opisana dla płytek, z tą różnicą, że zamiast podawać pożywkę na szalki Petriego, przed sterylizacją rozprowadza się ją między 10 a 12 ml w probówkach z pokrywką bakelitu.

Następnie probówki autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut. Wychodząc wychylają się za pomocą wsparcia i pozwalają się zestalić.

Przygotowane kliny są wysiewane przez powierzchnię i służą do utrzymania pewnych nie wymagających organizmów żywych mikroorganizmów przez określony czas.

Używa

Agar sojowy Trypticasein stosuje się w następujących przypadkach:

-Jako baza do przygotowania klasycznego agaru z krwią, który jest używany rutynowo w większości laboratoriów.

-Izolacja wymagających bakterii.

-Obserwacja wzoru hemolizy.

-Wykonanie testów diagnostycznych.

-Jako podstawa do przygotowania specjalnego agaru z krwią dla Corynebacterium diphteriae, z tellurium cystyną i krew baranka.

-Jako podstawa do przygotowania agaru z krwią jagnięcą, więcej kanamycyny-wankomycyny dla wzrostu beztlenowców, zwłaszcza Bacteroides sp.

-Do konserwacji niewymagających szczepów (Bacterioteca).

-Mikrobiologiczna liczba tlenowa w badaniu limitu mikrobiologicznego próbek wody, środowiska, żywności i kosmetyków.

Zasiane

Próbki można wysiewać bezpośrednio na powierzchni agaru sojowego trypticazyny uzupełnionego krwią lub innymi dodatkami. Jest zasiane przez wyczerpanie.

Zważywszy, że płytki z agarem sojowym tryptykazyny bez dodatków są na ogół stosowane do podhodowli szczepów mikrobiologicznych (bakterii lub drożdży).

Kontrola jakości

Kontrola sterylności

Aby sprawdzić sterylność różnych mediów przygotowanych z agarem sojowym trypticasein, zaleca się wykonać następujące czynności: z każdej przygotowanej partii 1 lub 2 płytki lub probówki powinny być inkubowane bez inokulacji w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny, aby wykazać sterylność. We wszystkich przypadkach musi pozostać bez wzrostu.

Jeśli zostanie znalezione zanieczyszczenie, całą partię należy wyrzucić.

Kontrola wzrostu

Aby zbadać prawidłowe działanie agaru sojowego trypticasein, można użyć następujących szczepów bakteryjnych: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 i Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Szczepy wysiewa się i inkubuje w aerobiozie w 37 ° C przez 24 godziny.

We wszystkich przypadkach wzrost musi być zadowalający.

Możesz także użyć grzybów jako kompleksu Candida albicans ATCC 10231 i Aspergillus niger ATCC 16404. Dla obu szczepów oczekuje się dobrego wzrostu.

Kontrola wzrostu i wzór hemolizy agaru sojowego tryptykazyny uzupełnionego krwią

Aby zweryfikować prawidłowe działanie agaru z krwią przygotowanego na tej podstawie, można użyć następujących szczepów: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 i Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Wysiewa się je i inkubuje w 37 ° C w mikroaerofilach przez 24 godziny.

We wszystkich przypadkach wzrost musi być satysfakcjonujący, biorąc pod uwagę, że w roku 2005 S. pyogenes beta-hemoliza (przezroczysta halo wokół kolonii) i w obu szczepach S. pneumoniae należy obserwować hemolizę alfa (zielonkawe halo wokół kolonii).

Referencje

1. Twórcy Wikipedii. Trypticase Jestem agarem. Wikipedia, wolna encyklopedia. 17 grudnia 2018, 15:47 UTC. Dostępne pod adresem: https://en.wikipedia.org
2. Laboratories Britania. Trytowy agar sojowy. 2015. Dostępny na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Tryptyk sojowy. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial.
5. Laboratoria BD Trypticase Jestem Agarem. 2014. Dostępny pod adresem: .bd.com