Przygotowanie podłoża i stosowanie Agar Salmonella-Shigella



The Agar Salmonella-Shigella znany również jako agar SS, jest umiarkowanie selektywnym i zróżnicowanym podłożem, specjalnie zaprojektowanym do izolacji bakterii enteropatogennych z rodzajów Salmonella i Shigella, zarówno z próbek środowiskowych, jak i klinicznych..

Agar SS ma złożoną kompozycję; Składa się z ekstraktu mięsnego, peptonu, laktozy, soli żółciowych, cytrynianu sodu, tiosiarczanu sodu, cytrynianu żelaza, agaru, czerwieni obojętnej, jasnozielonej i wody destylowanej. Biorąc pod uwagę jego dużą selektywność, możliwe jest sadzenie próbek z obfitą florą mieszaną.

W laboratoriach mikrobiologicznych pożywka Salmonella-Shigella jest szeroko stosowana do badania obecności Salmonella i Shigella w próbkach kału biegunki, ścieków, wody pitnej i żywności.

Czasami konieczne jest użycie bulionów przed wzbogacaniem (bulion laktozowy) i wzbogacenie (bulion seleninowo-cystynowy) w celu odzyskania szczepów Salmonella.

Kroki te są wymagane, gdy istnieje podejrzenie występowania Salmonelli w bardzo małej ilości lub gdy szczep może być źle traktowany przez procesy typowe dla produkcji przemysłowej, głównie przetworzonej żywności. Wskazane jest również wzbogacanie próbek kału od pacjentów, którzy byli leczeni antybiotykami.

Następnie wzbogacony bulion można wysiać na agarze Salmonella-Shigella i innych podobnych pożywkach, takich jak agar ksylozy, lizyna deoksysiloksanu (XLD) i dojelitowy agar Hektoen (HE).

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Moc żywieniowa
    • 1.2 Spójność
    • 1.3 Selektywny
    • 1.4 Różnicowy
  • 2 Przygotowanie
  • 3 Użyj
  • 4 Ograniczenia
  • 5 Kontrola jakości
  • 6 referencji

Fundacja

Każdy składnik pożywki hodowlanej Salmonella-Shigella ma określoną funkcję, a mieszanina jako całość nadaje jej właściwości, które ją charakteryzują.

Pożywna moc

Ekstrakt mięsny i pepton (strawiona kazeina i tkanka zwierzęca) dostarczają niezbędnych składników odżywczych (azotów, węgla i witamin) do rozwoju mikroorganizmów zdolnych do tolerowania pozostałych składników.

Spójność

Agar-agar jest odpowiedzialny za zapewnienie stałej konsystencji pożywki.

Selektywny

To podłoże jest wysoce selektywne, ponieważ zawiera sole żółciowe, cytrynian sodu i jasnozielony. Dlatego hamuje wzrost wszystkich bakterii Gram-dodatnich i większości bakterii Gram-ujemnych, w tym niektórych bakterii z grupy coli.

Chociaż bakterie z rodzaju Salmonella i niektóre szczepy Shigella wspierają te związki.

Przede wszystkim rodzaj Salmonella jest bardzo odporny na sole żółciowe, dzięki czemu są one w stanie żyć w woreczku żółciowym niektórych pacjentów-nosicieli, którzy stale wydalają bakterie z kału.

Różnicowy

Laktoza jest zdolnym do fermentacji węglowodanem, który pomaga odróżnić szczepy fermentujące laktozę od szczepów niefermentujących. O tej właściwości świadczy obecność wskaźnika pH, który w tym medium stanowi czerwień fenolowa.

Szczepy fermentujące laktozę dają czerwone kolonie, podczas gdy szczepy niefermentujące są bezbarwne. Ta cecha jest ważna, ponieważ Salmonella i Shigella nie fermentują laktozy.

Z drugiej strony medium to zawiera tiosiarczan sodu jako źródło siarki i cytrynianu żelaza jako źródło żelaza. Oba związki są w stanie odróżnić bakterie zdolne do wytwarzania siarkowodoru. Reagują one tworząc czarny osad nierozpuszczalnego i widocznego siarczku żelazowego.

Ta właściwość ma kilka szczepów z rodzaju Salmonella. Zazwyczaj ich kolonie są bezbarwne, płaskie z czarną kropką na środku. Reszta Salmonellas nie wytwarza H2S i rozwijać się jako bezbarwne kolonie.

Z drugiej strony, kolonie rodzaju Shigella są bezbarwne, płaskie bez czernienia.

Przygotowanie

Oznacza to, że przygotowanie jest bardzo proste.

Odważ 63 g odwodnionego podłoża handlowego i rozpuść w jednym litrze wody destylowanej. Podgrzej roztwór i zamieszaj. Mieszanina może osiągnąć wrzenie do minut.

To medium nie powinno autoklawować. Po rozpuszczeniu jest podawany bezpośrednio na pojedyncze lub podwójne jałowe płytki.

Po zestaleniu są one ułożone w odwrotny sposób u twórców płytki nazębnej i przechowywane w lodówce (2-8 ° C), dopóki nie zostaną użyte.

Po przygotowaniu podłoże powinno mieć pH 7,2 ± 0,2 i pomarańczową czerwień.

Ważne jest, aby umożliwić hartowanie płyt przed wysiewem próbek. Możesz bezpośrednio wysiać oryginalną próbkę, rozładowując materiał na części agaru, a następnie stamtąd przez wyczerpanie.

W przypadku użycia wzbogaconych bulionów przepuścić porcję bulionu selenitowego i wysiać szpatułką drigalską.

Inkubować w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Należy pamiętać, że ilość gramów do ważenia i końcowe pH medium mogą się różnić w zależności od domu handlowego. Płytka podstawy medium zawsze wskazuje wskazówki do jej przygotowania.

Użyj

Jest często stosowany w analizie kultur stolca oraz w badaniach mikrobiologicznych próbek wody resztkowej, wody pitnej i żywności.

Często przygotowuje się podwójne płytki, z jednej strony umieszcza się agar Salmonella-Shigella, a z drugiej strony agar XLD.

Ograniczenia

-Niektóre szczepy Shigella nie rosną w tym podłożu. Dlatego nie jest zalecany do pierwotnej izolacji tego rodzaju.

-Nie każda wyraźna kolonia z czarnym ośrodkiem wskazuje na Salmonella; należy wykonać testy biochemiczne w celu prawidłowej identyfikacji, ponieważ kolonie niektórych szczepów Proteus są nie do odróżnienia od kolonii Salmonelli.

-Odwodnione podłoże powinno być ostrożne z narażeniem na środowisko, ponieważ jest bardzo higroskopijne. Dlatego należy go przechowywać w suchym i dobrze zamkniętym środowisku. Otwarte na bardzo krótkie okresy.

-Z upływem czasu sole żółciowe w podłożu mogą się wytrącać, tworząc obraz podobny do matowego w agarze, ale nie wpływa to na wyniki.

-Niektóre szczepy Shigella mogą powoli fermentować laktozę.

Kontrola jakości

Aby udowodnić, że medium działa prawidłowo, zaleca się sadzić znane lub certyfikowane szczepy kontrolne i obserwować, czy wzrost spełnia oczekiwane cechy.

W tym celu szczepy E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium o Enterococcus faecalis.

Oczekiwane wyniki to:

Escherichia coli --różowe wypukłe kolonie.

Enterobacter i Klebsiella- duże kolonie i czerwony lub różowy śluz.

Shigella flexneri --jasne lub bezbarwne płaskie kolonie.

Salmonella typhimurium - bezbarwne kolonie z czarnym środkiem.

Enterococcus faecalis-- całkowite zahamowanie.

Referencje

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Dostępny na: f-soria.es
  2. Laboratorium BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Dostępny pod adresem: bd.com
  3. Laboratories Britania. Agar Salmonella-Shigella. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  4. Diagnostyka Valtek. Agar Salmonella-Shigella (SS Agar) .2010. Dostępne pod adresem: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.