Podstawa, przygotowanie i zastosowanie soli agaru i manitolu

The agar solny i mannitol lub słony mannitol jest stałym, selektywnym i zróżnicowanym podłożem hodowlanym. Został stworzony przez Chapmana do izolacji patogennych ziarniaków Gram-dodatnich, szczególnie Staphylococcus aureus.

Jednak przydatne jest również izolowanie Staphylococcus epidermidis, które czasami mogą być obecne jako oportunistyczny patogen i Staphylococcus saprophyticus, rozpoznany patogen moczowy, wśród innych gatunków.

Niektóre Enterococcus są w stanie rosnąć w tym podłożu, jak również pewne bakterie Gram-dodatnie tworzące przetrwalniki.

To podłoże jest bardzo przydatne w analizie próbek klinicznych, ale jest także wykorzystywane w badaniach mikrobiologicznych żywności i kontroli jakości produktów przemysłowych, takich jak kosmetyki, leki, między innymi..

Solony agar mannitol składa się z ekstraktów i peptonów wołowych, tryptyny, mannitolu, chlorku sodu, czerwieni fenolowej i agaru.

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
• 3 zastosowania
• 4 Kontrola jakości
• 5 Uwagi końcowe
• 6 referencji

Fundacja

Agar mannitol jest selektywny dzięki wysokiej koncentracji soli. Zasolenie działa jako substancja hamująca i zapobiega rozwojowi bakterii Gram-ujemnych.

Jest również zróżnicowany ze względu na obecność węglowodanu mannitolu i czerwonego wskaźnika pH fenolu. Na tej podstawie bakterie zdolne do fermentacji mannitolu wytwarzają kwasy, zakwaszają pożywkę, zmieniają kolonie i średnie żółte.

Z drugiej strony, kolonie, które nie fermentują mannitolu, rosną w pożywce, przyjmując składniki odżywcze dostarczane przez ekstrakty i peptony mięsa i tripteiny. Stamtąd bakterie wydobywają węgiel, azot, witaminy i minerały niezbędne do ich wzrostu.

Kolonie w tym przypadku mogą być słabe lub silne różowe, a podłoże pozostaje w tym samym kolorze lub zmienia się w fuksję.

Agar to substancja zapewniająca konsystencję pożywki.

Przygotowanie

Aby przygotować jeden litr solonego agaru mannitolowego, 111 g odwodnionej pożywki preferencyjnego domu handlowego waży się i rozpuszcza w 1000 ml wody destylowanej, używając fioli.

Ciepło jest stosowane przez częste usuwanie medium w celu poprawy procesu rozpuszczania. Niech się zagotuje przez minutę.

Umieścić fiola w autoklawie w temperaturze 121 ° C na 15 minut.

Pod koniec czasu fiolę wyjmuje się z autoklawu, odstawia i podaje od 15 do 20 ml na sterylnych płytkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 do 55 ° C.

Pozwala się na zestalenie, zamawiając w plaqueros w formie odwróconej i przechowując w lodówce do momentu użycia. Przed posadzeniem próbki należy poczekać, aż płyta odbierze temperaturę otoczenia.

Płytki wysiewa się przez prążkowanie lub wysiewając na powierzchni szpatułką drigalską. Końcowe pH przygotowanego podłoża powinno wynosić 7,4 ± 0,2

Barwa odwodnionego podłoża jest jasnobeżowa, a kolor przygotowanego podłoża jest pomarańczowy czerwony.

Używa

Ze względu na wysoką selektywność medium to jest idealne do sadzenia próbek z mieszaną florą, w której chce się szukać obecności Staphylococcus aureus, jako główny patogen tego rodzaju.

W tym sensie jednym z jej najczęstszych zastosowań jest analiza mikrobiologiczna próbek wysięków z gardła i wydzieliny z nosa, zwłaszcza w celu wykrycia bezobjawowych nosicieli S. aureus.

Niektóre kraje wdrożyły tę analizę jako obowiązkowy wymóg dla osób, które chcą pracować jako sprzedawcy żywności.

Kontrola ta uniemożliwia zatrudnianie osób, które są nosicielami S. aureus, unikając w ten sposób masowego zatrucia pokarmowego, ze względu na spożycie żywności zanieczyszczonej enterotoksyną gronkowcową.

Można go również włączyć do siewu zakażeń ran, posiewów krwi, CSF, płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, między innymi..

Solony agar z mannitolem jest przydatny do ponownego izolowania kolonii kultur moczu z agaru CLED lub agaru z krwią, którego Gram ujawnił ziarniaki Gram-dodatnie w skupiskach.

Obowiązuje również w analizie mikrobiologicznej żywności, wody pitnej, gleb, między innymi.

Kontrola jakości

Po przygotowaniu partii płytek z solonym agarem mannitolowym zaleca się przeprowadzenie kontroli jakości. Szczepy kontrolne są wysiewane, aby pokazać, czy jest wzrost, czy nie.

Jako kontrola pozytywna znane szczepy Staphylococcus aureus. Musi rosnąć w sposób zadowalający, rozwijając żółte kolonie, a medium staje się również tym samym kolorem.

Podobnie dogodne jest włączenie znanego szczepu Staphylococcus epidermidis. Musi rosnąć w sposób zadowalający, rozwijając różowe kolonie, a podłoże pozostaje w tym samym kolorze lub ciemnieje w mocniejszym różu.

Jako kontrola negatywna stosuje się szczepy, które nie powinny rosnąć w tym podłożu. Na przykład możesz zasadzić znany szczep Escherichia coli lub Klebsiella pneumoniae. Oczekiwanym rezultatem jest całkowite zahamowanie, to znaczy brak wzrostu.

Dodatkowo należy inkubować płytkę bez inokulacji. W nim nie powinno być wzrostu, nie ma zmiany koloru.

Ważne jest, aby nie używać płytki, jeśli istnieją oznaki pogorszenia, takie jak między innymi zanieczyszczenie, odwodnienie, odbarwienie..

Uwagi końcowe

Przy stosowaniu solonego agarowego mannitolu należy wziąć pod uwagę kilka ważnych aspektów:

-Uzyskanie wzrostu żółtych kolonii nie oznacza, że ​​tak jest Staphylococcus aureus. Należy pamiętać, że niektóre szczepy Enterococcus są w stanie rosnąć w tej pożywce i fermentować mannitol, a także niektóre Gram-dodatnie bakterie tworzące przetrwalniki..

Dlatego ważne jest, aby wykonać Grama w kolonii i przeprowadzić test katalazy.

-Z drugiej strony należy uznać, że inne gatunki Staphylococcus różnią się od innych aureus Są również zdolne do fermentacji mannitolu. Dlatego ważne jest, aby podhodować kolonię do bulionu odżywczego, z którego można ją pobrać i wykonać test koagulazy.

Wśród gatunków Staphylococcus o znaczeniu klinicznym dla człowieka fermentacja mannitolu to: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, między innymi.

Inni mogą dawać zmienną reakcję, to znaczy czasami pozytywną, a czasem negatywną. Niektóre są S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, między innymi.

-Nie zaleca się pobierania kolonii bezpośrednio z agaru mannitolowego w celu wykonania testu koagulazy, ponieważ wysokie stężenie soli w podłożu może zakłócać wynik.

-Na koniec zaleca się inkubację płytek wysianych solonym mannitolem przez okres do 48 godzin, ze względu na fakt, że niektóre szczepy S. aureus Mogą powoli fermentować mannitol, choć nie jest to zbyt częste.

Referencje

1. Laboratories Britania. Słony agar z mannitolem. 2015. Dostępny na: britanialab.com
2. „Solony Mannitol Agar”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 31 października 2018, 19:08 UTC. 17 stycznia 2019, 20:55, dostępny na: en.wikipedia.org.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial
5. Laboratoria BD BD Mannitol Salt Agar. 2013. Dostępny pod adresem: bd.com.