Pożywne podłoże agarowe, przygotowanie i zastosowanie



The pożywny agar jest to nieselektywna i nieróżnicowa stała pożywka hodowlana. W tym środowisku rosną wszelkiego rodzaju bakterie niewymagające z żywieniowego punktu widzenia.

Jest to prosty sposób i, pomimo swojej nazwy, zawiera mniejszą wartość odżywczą w porównaniu z innymi podobnymi mediami, takimi jak agar z sercem do infuzji mózgowej lub agar z tryptozyną sojową.

Jego przydatność w laboratorium jest bardzo zróżnicowana. Stosowany głównie do subkultury gatunków, utrzymania szczepów, liczenia kolonii, jako podstawa do przygotowania agaru krwi, między innymi.

Podobnie, ze względu na jego jasny beżowy kolor, wytwarzanie pigmentów wytwarzanych przez niektóre szczepy bakteryjne, takie jak zielonkawy pigment Pseudomonas aeruginosa, wytwarzany przez Serratia marcescens w temperaturze pokojowej, złoty żółty pigment Staphylococcus aureus, między innymi.

Ponadto jest to jeden z najbardziej ekonomicznych podłoży uprawowych na rynku.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Skład
  • 3 Przygotowanie
  • 4 zastosowania
    • 4.1 Jako podstawa do przygotowania agaru z krwią
    • 4.2 Stymulowanie sporulacji bakterii tworzących przetrwalniki
    • 4.3 Konserwacja naprężeń
    • 4.4 Liczenie kolonii
    • 4.5 Wykonanie testów diagnostycznych
    • 4.6 Odzyskiwanie mezofilnych aerobowych rekreacyjnych wód solankowych (Plaże)
  • 5 referencji

Fundacja

Jak już wspomniano, jest to bardzo prosty sposób polegający na dostarczaniu substancji odżywczych do wzrostu bakterii bez ograniczeń i bez złożonych reakcji interpretacyjnych.

Ponieważ medium jest półprzezroczyste, idealnie nadaje się do liczenia kolonii metodą siewu na głębokość.

Skład

Składa się głównie z ekstraktu mięsnego lub ekstraktu drożdżowego, peptonów lub trawienia żelatyny trzustkowej, agaru, chlorku sodu i wody destylowanej.

Ekstrakt z mięsa lub drożdży i peptonów reprezentuje źródła węgla i niezbędnych minerałów (azotu, fosforu i siarki), które będą wykorzystywane przez bakterie jako źródło energii i czynniki wzrostu.

Podobnie agar-agar jest podstawą wszystkich stałych podłoży hodowlanych, zastępując żelatynę, która była pierwszym związkiem podstawowym stosowanym przez Roberta Kocha, aby nadać jego mediom stałą konsystencję..

Agar jest polisacharydem złożonym z galaktozy, galaktomannanu, agarozy i agaropektyny. Ustawia się na 40 ° C i topi się w pobliżu 100 ° C.

Ze swojej strony chlorek sodu zapewnia pożywce osmolarność niezbędną do rozwoju bakterii.

Wreszcie woda służy do uwodnienia i rozpuszczenia liofilizowanych związków. Należy użyć wody destylowanej dostosowanej do neutralnego pH. Woda z kranu nie powinna być stosowana, ponieważ zawiera wapń i magnez, które mogą reagować z fosforanami w podłożu i tworzyć nierozpuszczalne sole.

Przygotowanie

Na jeden litr agaru odżywczego należy zważyć 31 g odwodnionej pożywki. Umieszcza się go w fioli i rozpuszcza w litrze wody destylowanej. Po 5 minutach odpoczynku podgrzać źródło ciepła i stale mieszać, aż zagotuje się przez 1 lub 2 minuty.

Następnie umieść fiolę w autoklawie i sterylizuj w 121 ° C przez 20 minut.

Pod koniec czasu wyjmuje się go z autoklawu i podaje w sterylnych szalkach Petriego, używając okapu laminarnego lub palnika Bunsena..

Jeśli płytki Petriego są jednorazowego użytku (plastik), podłoże powinno być rozprowadzone, gdy agar ma temperaturę około 50 ° C, aby zapobiec ich deformacji przez nadmierne ciepło.

Pozostawić do zestalenia i przechowywać w odwróconym uchwycie na płytki i przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8 ° C do momentu użycia.

Płyty muszą być hartowane przed wysiewaniem. Nie należy stosować odżywczych płytek agarowych, jeśli są zanieczyszczone lub odwodnione.

Wartość pH przygotowanego podłoża należy dostosować do 7,3 ± 0,2.

Używa

Jest to najprostsza pożywka hodowlana stosowana w laboratorium mikrobiologicznym. Jego formuła doskonale nadaje się do wzrostu niewymagających bakterii.

Główne zastosowania są wyjaśnione poniżej:

Jako baza do przygotowania agaru z krwią

Podłoże to jest czasami używane jako baza do przygotowania agaru z krwią, jednak nie jest to najczęściej stosowana baza.

Stymuluj sporulację bakterii tworzących przetrwalniki

Ta pożywka hodowlana jest szczególnie przydatna do stymulowania sporulacji bakterii tworzących przetrwalniki, takich jak Bacillus sp.

Aby to zrobić, wysiewa się szczep rodzaju Bacillus i inkubowano przez 24 godziny w 37 ° C w aerobiozie. Po wyhodowaniu kolonii płytkę poddaje się działaniu temperatury, tj. Temperaturę pieca zwiększa się do 44 ° C i pozostawia na kolejne 24 godziny lub wprowadza do lodówki na 24 godziny.

Pod koniec uprawy kultury wysuwa się i barwi barwnikiem Grama lub barwnikiem zarodników Shaeffer-Fulton. W nich będą obserwowane laseczki z endosporami (zarodniki wewnątrz Bacillus) i egzospory (zarodniki poza Bacillus)..

Konserwacja naprężeń

Niektóre laboratoria badawcze lub uniwersyteckie laboratoria wspomagające nauczanie muszą utrzymywać żywe, ważne klinicznie bakterie tak długo, jak to możliwe, w celu wykorzystania banku bakterii (bacteriotheca) do prac badawczych lub do przygotowania praktyk dydaktycznych. Uczniowie nauczą się manipulować i identyfikować te mikroorganizmy.

W tym celu można użyć agaru odżywczego, a także agaru z sercem do infuzji mózgu. Agar jest przygotowywany, wlewany do rurek z bakelitem i przechylany na podstawie w taki sposób, że agar zestala się tworząc blok na dole i fazę na powierzchni (pik fletu).

Każda probówka jest oznaczona poprzez umieszczenie nazwy bakterii do posadzenia i daty. Na ramce każda z bakterii zostanie posadzona i inkubowana przez 24 godziny, po hodowaniu kolonii probówki są przechowywane w temperaturze pokojowej.

Bakterioteca musi być odnowiona od 1 do 3 miesięcy, aby uniknąć zanieczyszczenia i odwodnienia podłoża, a także śmierci bakterii.

W ten sposób można utrzymać tylko niewymagające bakterie.

Liczenie kolonii

Chociaż istnieją wyspecjalizowane środki do liczenia kolonii, takie jak standardowy agar zliczający, do tego celu można użyć agaru odżywczego, albo przez siew na powierzchni szpatułką drigalską, albo przez głębokość. Dlatego jest bardzo przydatny w analizie mikrobiologicznej żywności i wody.

Wykonanie testów diagnostycznych

Ponieważ jest to medium, które nie zawiera krwi ani żadnego innego dodatku, idealnie nadaje się do pobierania kolonii wyhodowanych na tym podłożu w celu przeprowadzenia testu katalazy.

Podobnie, ze względu na jego wyraźny kolor, wskazane jest wykonywanie testów oksydazy bezpośrednio na obszarze zaszczepionego agaru, bez zakłóceń.

Odzyskiwanie mezofilnych aerobowych rekreacyjnych wód solankowych (Plaże)

Agar odżywczy z 10% wodą morską jest przydatny do oceny mezofilnych tlenków w wodach plażowych.

W ten sposób możemy docenić poziom rzeczywistego zanieczyszczenia wody tymi drobnoustrojami, ponieważ w tego typu próbkach wyniki nakładają się na siebie przy użyciu pożywek hodowlanych przygotowanych w konwencjonalny sposób.

Zostało to wykazane przez Corteza i in. w 2013 r. w artykule badawczym.

Jest to możliwe do wyjaśnienia ze względu na nagłą zmianę, którą przechodzą bakterie, przechodząc ze środowiska o nadmiernym zasoleniu do środowiska o niskiej zawartości soli, dlatego mikroorganizmy wchodzą w stan letargu, w którym są żywe, ale nie nadają się do uprawy.

Referencje

  1. „Pożywny agar”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 13 września 2016 r., 20:33 UTC. 29 grudnia 2018, 21:04 pl.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Wpływ pożywek hodowlanych przygotowanych wodą morską na wskaźniki zdrowotne w wodach morskich uzdrowisk Chichiriviche, stan Falcón, Wenezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M i Cardoso M. Mikrobiologiczna jakość wody do inseminacji dawek dla Suinos.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Usługa publikacji UCA.