Podstawa, przygotowanie i zastosowanie MacConkey Agar



The Agar MacConkey Jest to stała pożywka hodowlana, która umożliwia wyłączną izolację pałeczek Gram-ujemnych. Z tego powodu jest to podłoże selektywne, a także pozwala na rozróżnienie między fermentującymi i niefermentującymi pałeczkami laktozy, co czyni je medium różnicowym. Jest to jeden z najczęściej używanych nośników kultury w laboratorium mikrobiologicznym.

Podłoże to jest używane głównie do izolacji bakterii Gram-ujemnych należących do rodziny Enterobacteriaceae, w tym gatunki oportunistyczne i enteropatogenne.

Może być również stosowany do izolowania innych pałeczek jelitowych, które zamieszkują przewód pokarmowy, ale nie należą do Enterobacteriaceae, jak Aeromonas sp, Plesiomonas sp, między innymi.

Wreszcie, może izolować inne Gram-ujemne, niefermentujące pałeczki glukozy, które znajdują się w środowisku, wodzie lub glebie, ale które czasami mogą być oportunistycznymi patogenami, takimi jak Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alkaline sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, między innymi.

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 MacConkey Agar
  • 2 Przygotowanie
  • 3 zastosowania konwencjonalnego agaru MacConkeya
  • 4 Inne warianty agaru MacConkey
    • 4.1 Agar MacConkey z sorbitolem
    • 4.2 Agar MacConkey bez fioletu krystalicznego lub soli
    • 4.3 Agar MacConkey z cefoperazonem
    • 4.4 MacConkey Agar przygotowany z 10% wodą morską v / v
  • 5 referencji

Fundacja

Agar MacConkey

Podstawę tego medium można wyjaśnić poprzez opis jego składników, ponieważ każdy z nich ma cel, który określa jego właściwość.

Sole żółciowe i fioletowe kryształy

W tym sensie agar MacConkey ma złożoną kompozycję. Przede wszystkim zawiera sole żółciowe i fioletowy kryształ.

Elementy te są odpowiedzialne za hamowanie wzrostu bakterii Gram-dodatnich i niektórych wymagających pałeczek Gram-ujemnych. To z kolei sprzyja rozwojowi Gram-ujemnych pałeczek, na które te substancje nie mają wpływu. Dlatego jest to medium selektywne.

Mówi się, że jest nieco selektywny w porównaniu z innymi mediami, które hamują również wzrost bakterii Gram-dodatnich, a także większości bakterii Gram-ujemnych.

Jest niezwykle selektywny dla określonego rodzaju, takiego jak agar TCBS do izolacji Vibrio cholerae i inne podobne gatunki halofilne i alkalofilne.

Peptony, polipektony i laktoza

Zawiera substancje, które dostarczają niezbędnych składników odżywczych mikroorganizmom, które rozwijają się w tym podłożu, takie jak peptony, polipektony i laktoza.

Laktoza jest kluczowym punktem dla podłoża, które ma być podłożem różnicowym, ponieważ mikroorganizmy, które mają zdolność do fermentacji laktozy, będą rozwijać silne różowe kolonie.

Niektóre bakterie mogą fermentować laktozę powoli lub słabo, rozwijając jasnoróżowe kolonie i pozostając laktozą dodatnią.

Te, które nie fermentują laktozy, wykorzystują peptony jako źródło energii, wytwarzając amoniak, alkalizując podłoże. Dlatego kolonie, które pochodzą, są bezbarwne lub przezroczyste.

Wskaźnik PH

Zmiana koloru jest uzyskiwana poprzez inny istotny związek, który ma agar MacConkeya. Ten związek jest wskaźnikiem pH, który w tym przypadku jest czerwony.

Fermentacja laktozy powoduje wytwarzanie mieszanych kwasów. Zakwaszają podłoże przy pH poniżej 6,8..

Powoduje to, że wskaźnik pH zmienia się w intensywny różowy odcień. Intensywność koloru może się różnić w zależności od końcowego pH.

Woda destylowana, chlorek sodu i agar

Z drugiej strony zawiera wodę destylowaną i chlorek sodu, które nadają pożywce równowagę i równowagę osmotyczną. Wreszcie pożywka zawiera agar, który jest bazą zapewniającą konsystencję stałego podłoża.

Przygotowane podłoże agarowe MacConkey musi mieć końcowe pH ustawione na 7,1 ± 0,2..

Przygotowanie

Na jeden litr agaru MacConkey należy zważyć 50 g odwodnionego podłoża, a następnie umieścić je w fioli i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Po 10 minutach odpoczynku ogrzewa się przez ciągłe mieszanie aż do wrzenia przez 1 minutę.

Następnie umieść fiolę w autoklawie i sterylizuj w 121 ° C przez 20 minut. Pod koniec czasu usuwa się go z autoklawu i pozostawia do ostygnięcia do temperatury 45 ° C, a następnie podaje w sterylnych szalkach Petriego wewnątrz kaptura z przepływem laminarnym lub przed palnikiem Bunsena..

Pozostawić do zestalenia i przechowywać w odwróconym uchwycie na płytki i przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8 ° C do momentu użycia.

Aby uzyskać agar MacConkey, który hamuje efekt swarningu wytwarzany przez rodzaj Proteus, stosuje się agar MacConkey o niskiej zawartości soli..

Zastosowania konwencjonalnego agaru MacConkeya

Agar MacConkey jest zawarty we wszystkich zestawach pożywek hodowlanych przystosowanych do siewu próbek klinicznych otrzymanych w laboratorium. Jest również przydatny w mikrobiologii żywności i mikrobiologii środowiskowej.

Różnorodność Gram-ujemnych pałeczek rosnących w tej pożywce wyraża cechy fenotypowe, które pomagają przypuszczalnie zdiagnozować dany gatunek. Na przykład rozmiar, kolor, konsystencja i zapach kolonii to tylko niektóre z cech, które mogą kierować.

W tym środowisku gatunki Escherichia coli, Klebsiella sp i Enterobacter sp wytwarzają silne różowe kolonie, otoczone obszarem wytrąconej żółci.

Tak dużo bakterii jak Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp i Hafnia sp mogą pojawić się bez koloru po 24 godzinach lub jasnoróżowym w ciągu 24 -48 godzin.

Podobnie rodzaje Proteus, Edwadsiella, Salmonella i Shigella wytwarzają bezbarwne lub przezroczyste kolonie.

Inne warianty agaru MacConkey

Istnieją inne warianty agaru MacConkey, które mają określone cele. Następnie są wymienione:

Agar MacConkey z sorbitolem

Podłoże to zostało zaprojektowane w celu odróżnienia szczepu enteropatogennego (Escherichia coli enterohemorrhagic O157: H7) reszty szczepów Escherichia coli.

Medium to zmienia laktozę węglowodanową na sorbitol. Szczepy E. coli enterohaemorrhagic O157: H7 różnią się od reszty, ponieważ nie fermentują sorbitolu i dlatego uzyskuje się przezroczyste kolonie, jednak reszta szczepów E. coli jeśli fermentują sorbitol, a kolonie są silnie różowe.

Agar MacConkey bez fioletu krystalicznego lub soli

Ten agar różni się znacznie od klasycznego agaru MacConkey, ponieważ nie ma fioletu krystalicznego, bakterie Gram-dodatnie mogą rosnąć.

Z drugiej strony, brak soli hamuje pojawienie się roju na agarze wytwarzanym przez niektóre pałeczki jelitowe, takie jak te z rodzaju Proteus, a tym samym ułatwiają izolację wszystkich obecnych bakterii, w tym bakterii Gram-dodatnich.

Agar MacConkey z cefoperazonem

Ten wariant agaru MacConkey został zaprojektowany tak, aby początkowo go izolować Laribacter hongkongensis a później zdali sobie sprawę, że jest to przydatne do izolacji Arcobacter butzleri. AOba są lekko zakrzywionymi ujemnymi bakteriami Gram odpornymi na cefoperazon.

Bakterie te zostały niedawno połączone jako przyczyny zapalenia żołądka i jelit oraz biegunki nabyte u osób azjatyckich i europejskich, pojawiające się jako dwa silne wschodzące patogeny.

Antybiotyk pozwala zahamować towarzyszącą florę przewodu pokarmowego, co sprzyja rozwojowi tych bakterii, zapobiegając ich niezauważeniu, ponieważ wymagają 72 godzin wzrostu.

MacConkey Agar przygotowany z 10% wodą morską v / v

Wariant ten jest przydatny do oceny wskaźników zdrowia bakteryjnego zanieczyszczenia kałowego, w tym bakterii z grupy coli i bakterii grupy coli w wodach rekreacyjnych (plaże i zatoki).

Cortez i wsp. 2013 wykazali, że przygotowane w ten sposób podłoże znacznie zwiększa odzyskiwanie tych mikroorganizmów w środowisku soli fizjologicznej, w porównaniu z użyciem agaru MacConkey przygotowanego z wodą destylowaną..

Dzieje się tak, ponieważ zmodyfikowane podłoże stymuluje wzrost bakterii, które są fizjologicznie w stanie uśpienia „zdolne do życia, ale nie nadające się do uprawy”, dlatego nie można ich odzyskać w konwencjonalnych mediach.

Referencje

  1. Lau SK, Woo PC, Hui WT i in. Zastosowanie agaru cefoperazon MacConkey do selektywnej izolacji Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
  2. „Agar MacConkey”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 4 kwietnia 2018, 18:16 UTC. 29 grudnia 2018, 15:22 pl.wikipedia.org
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
  5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Wpływ pożywek hodowlanych przygotowanych wodą morską na wskaźniki zdrowotne w wodach morskich uzdrowisk Chichiriviche, stan Falcón, Wenezuela. Rev Soc Come Microbiol 2013; 33: 122-128
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Usługa publikacji UCA.