Agar LIA (Żelazo Lizynowe), przygotowanie i zastosowanie



The Agar LIA (Żelazo lizynowe) to test biochemiczny stosowany do identyfikacji bakterii z rodziny Enterobacteriaceae. To medium zostało stworzone przez Edwardsa i Fife, w oparciu o formułę Falkowa.

Pierwotnie test ten był bulionem zawierającym peptony, ekstrakt drożdżowy, glukozę, L-lizynę, purpurę bromokrezolową i wodę destylowaną. Edwards i Fife dodali agar-agar, cytrynian amonu żelaza i tiosiarczan sodu.

Test polega zasadniczo na wykazaniu obecności enzymu dekarboksylazy lizyny, zdolnego do reakcji z grupą karboksylową aminokwasu L-lizyny. Deaminacja aminokwasu może również wystąpić z powodu obecności enzymu deaminazy lizynowej.

Ponadto skład pożywki pozwala zademonstrować zdolność niektórych rodzajów bakterii do wytwarzania siarkowodoru. Wreszcie, możliwe jest również obserwowanie generowania lub nie gazu w środku.

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1,1 Peptony i ekstrakt drożdżowy
    • 1.2 Glukoza
    • 1.3 L-lizyna
    • 1.4 wskaźnik pH (purpurowy bromokrezol)
    • 1.5 Amoniakowy cytrynian żelaza i tiosiarczan sodu
  • 2 Interpretacja testu
    • 2.1 Dekarboksylacja lizyny
    • 2.2 Deaminacja lizyny
    • 2.3 Produkcja siarkowodoru (H2S)
  • 3 Zapis wyników
  • 4 Przygotowanie
  • 5 zastosowań
  • 6 referencji

Fundacja

Peptony i ekstrakt drożdżowy

Podobnie jak większość podłoży hodowlanych, agar z żelazną lizyną zawiera składniki, które stanowią źródło składników odżywczych niezbędnych do rozwoju bakterii. Składniki te są reprezentowane przez peptony i ekstrakt drożdżowy.

Glukoza

Ten agar zawiera także fermentowalną glukozę węglowodanową. Wiadomo, że wszystkie bakterie z rodziny Enterobacteriaceae fermentują glukozę.

Ten krok ma kluczowe znaczenie, ponieważ będzie odpowiedzialny za zakwaszenie pożywki, niezbędny warunek działania enzymu dekarboksylazy lizyny, jeśli jest obecny, na jego substrat.

W niektórych rodzajach bakterii można zaobserwować wytwarzanie gazu w wyniku fermentacji glukozy.

Gaz jest potwierdzany, gdy następuje przemieszczenie agaru w rurze, pozostawiając pustą przestrzeń na dnie rurki lub przez rozbicie medium na dwie lub więcej części.

L-lizyna

Gdy lizyna jest dekarboksylowana, powstaje diamina (kadaweryna) i dwutlenek węgla.

Dekarboksylacja zachodzi w obecności fosforanu pirydoksalu koenzymowego. Ta reakcja jest nieodwracalna.

Wskaźnik PH (purpurowy bromokrezol)

Wszystkie zmiany pH wystąpiły w podłożu w wyniku różnych reakcji, są wykrywane przez wskaźnik pH fioletu bromokrezolowego.

W tym sensie, gdy następuje zakwaszenie, medium staje się żółte, a gdy następuje alkalizacja, medium powraca do pierwotnego purpurowego lub purpurowego koloru.

Gdy deaminacja lizyny następuje przez obecność enzymu deaminazy lizynowej, na powierzchni powstaje czerwonawy kolor, typowy dla rodzajów Proteus, Providencia i niektórych gatunków Morganella.

Wynika to z faktu, że podczas procesu deaminacji powstaje kwas alfa-keto-węglowy, który reaguje z cytrynianem amonu w obecności tlenu, co powoduje wspomniany kolor.

Cytrynian amonowy żelaza i tiosiarczan sodu

Z drugiej strony, bakterie wytwarzające siarkowodór zostaną udowodnione przez obecność tiosiarczanu sodu (źródło siarki) i cytrynianu amonu żelaza, który jest twórcą H2S.

Bakterie posiadające enzym reduktazy tiosiarczanowej mają zdolność działania poprzez redukcję obecnego tiosiarczanu sodu, tworząc siarczyn i siarkowodór (H2S).

Ten ostatni jest gazem bezbarwnym, ale gdy reaguje z solą żelaza tworzy metaliczny siarczek żelaza, który jest związkiem nierozpuszczalnym (widoczny czarny osad).

Jednak zdolność formowania H2S z tym podłożem nie jest bardzo wiarygodne, ponieważ niektóre negatywne bakterie dekarboksylazy lizyny zdolne do wytwarzania H2S nie tworzy czarnego osadu, ponieważ zakwasza się kwasowość medium. Dlatego zaleca się sprawdzenie innymi środkami zawierającymi żelazo.

Interpretacja testu

Dekarboksylacja lizyny

Probówki należy odczytać po upływie 24 godzin inkubacji, w przeciwnym razie istnieje ryzyko błędnej interpretacji reakcji, zgłaszając fałszywe wyniki negatywne.

Należy pamiętać, że pierwszą reakcją, która nastąpi, będzie fermentacja glukozy, dlatego wszystkie probówki po 10–12 godzinach będą żółknąć.

Jeśli pod koniec okresu inkubacji (24 godziny) obserwuje się żółte tło o purpurowej lub purpurowej powierzchni, reakcja jest negatywna. Purpurowy kolor powierzchni odpowiada alkalizacji podłoża za pomocą peptonów.

Pozytywna reakcja to taka, w której dno i powierzchnia tuby są całkowicie fioletowe, to znaczy powraca do pierwotnego koloru.

Dlatego, kto określa pozytywność testu, jest podstawą lub dnem medium. Jeśli masz wątpliwości co do koloru, możesz porównać go z nieinokulowaną rurką LIA.

Deaminacja lizyny

Rurka, która świadczy o deaminacji lizyny, będzie miała czerwonawo-brązową powierzchnię i żółte tło (kwas) lub całą czerwonawo-brązową rurkę..

Ta reakcja jest interpretowana jako negatywna dla dekarboksylacji lizyny, ale pozytywna dla deaminacji lizyny.

Ta reakcja jest zdefiniowana i interpretowana w skosie.

Produkcja siarkowodoru (H2S)

Pozytywną reakcję obserwuje się przez pojawienie się czarnego osadu w całości lub części podłoża. Ogólnie między granicą skosu a podstawą.

Jeśli osad pojawi się w całej rurze, nie pokaże innych reakcji, które występują w ośrodku.

Zapis wyników

Podczas interpretacji testu wyniki są rejestrowane w następujący sposób:

Najpierw przeczytaj fazę, potem spód lub taco, a następnie produkcję H2S i wreszcie produkcja gazu.

Przykład: K / A + (-). Oznacza to:

  • K: Alkaline bezel (fioletowy)
  • O: Tło kwaśne (żółte), to znaczy negatywna reakcja dekarboksylacji i negatywna deaminacja.
  • +: Produkcja siarkowodoru
  • (-): Bez gazu.

Przygotowanie

Odważ 35 żelazo agaru lizynowego odwodnionego żelaza i rozpuść w jednym litrze wody destylowanej.

Ogrzewać, aż agar całkowicie się rozpuści, więc gotować przez minutę, często mieszając. Rozprowadzić 4 ml podłoża w probówkach 13/100 z bawełnianą pokrywką.

Sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut. Wyjmij z autoklawu i pozwól odpocząć w sposób nachylony, w taki sposób, aby była głęboka podstawa i krótki skos.

Przechowywać w lodówce 2-8 ° C Pozwól się uspokoić przed posadzeniem szczepu bakteryjnego.

Barwa odwodnionego podłoża jest beżowa, a podłoże przygotowuje czerwonawo-purpurowy kolor.

Końcowe pH przygotowanego podłoża wynosi 6,7 ± 0,2.

Medium staje się żółte z pH równym lub mniejszym niż 5,2 i purpurowym przy pH 6,5 w górę.

Używa

Ten test, wraz z innymi testami biochemicznymi, jest stosowany do identyfikacji prątków z rodziny Enterobacteriaceae..

Medium wysiewa się za pomocą prostej pętli lub igły, jeden lub dwa stemple wykonuje się na dnie rury, a następnie powierzchnia medium jest zygzakowata.

Inkubuje się przez 24 godziny w 35-37 ° C w aerobiozie. Jeśli to konieczne, pozostaje inkubacja przez 24 godziny więcej.

Przydatne jest głównie odróżnienie gatunków laktozy negatywnej Citrobacter od Salmonellas sp.

Referencje

  1. Mac Faddin J. (2003). Testy biochemiczne do identyfikacji bakterii o znaczeniu klinicznym. 3rd ed. Od redakcji Panamericana. Buenos Aires Argentyna.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.
  4. Laboratories Britania. Żelazny agar lizynowy. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  5. Laboratoria BD BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Dostępny pod adresem: bd.com
  6. Valtek Laboratories Średni L.I.A. 2009. Dostępny pod adresem: andinamedica.com