Fundacja Agar Hektoen, przygotowanie i zastosowanie



The Agar Hektoen lub dojelitowy agar Hektoen jest stałą, selektywną i zróżnicowaną pożywką hodowlaną. Został stworzony w Instytucie Hektoena przez Kinga i Metzgera w celu izolacji bakterii enteropatogennych z rodzajów Shigella i Salmonella..

Podłoże składa się z peptonu proteozowego, ekstraktu drożdżowego, soli żółciowych, laktozy, sacharozy, salicyny, tiosiarczanu sodu, chlorku sodu, cytrynianu żelaza, cytrynianu amonu, błękitu bromotymolowego, fuksyny kwasowej i agaru. Ten preparat pozwala odróżnić rodzaje Shigella i Salmonella od reszty bakterii zdolnych do wzrostu w tym podłożu.

Chociaż istnieją inne środki o tej samej funkcji co agar Hektoen, daje to większą przewagę w porównaniu z innymi środkami, zwłaszcza gdy chcesz odzyskać gatunki Shigella.

Gatunki obu rodzajów powodują u ludzi poważne problemy żołądkowo-jelitowe z powodu spożycia skażonej żywności; dlatego transmisja jest kałowa - ustna. Dlatego stosowanie agaru Hektoen jest głównie wskazane w analizie mikrobiologicznej próbek kału i żywności..

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Przygotowanie
  • 3 Użyj
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 Ograniczenia
  • 6 referencji

Fundacja

Agar Hektoen zawiera peptony i ekstrakt drożdżowy jako źródło składników odżywczych, dostarczając niezbędnych elementów do rozwoju mikrobiologicznego.

Jednak ma również sole żółciowe, które działają poprzez hamowanie wzrostu niektórych bakterii, zwłaszcza Gram-dodatnich i niektórych Gram-ujemnych. Z tego powodu jest uważany za medium selektywne.

Z drugiej strony, agar Hektoen jest medium różnicowym. Ta właściwość jest spowodowana obecnością ulegających fermentacji węglowodanów, takich jak laktoza, sacharora i salicyna, wraz z systemem wskaźnika pH, reprezentowanym przez błękit bromotymolowy i fuksynę kwasową..

Wszystkie bakterie zdolne do wzrostu w tym podłożu, które nie należą do rodzaju Salmonella i Shigella, będą rozwijać kolonie łososia lub pomarańczy, z wyjątkiem rodzaju Proteus. Wynika to z fermentacji jednego lub kilku obecnych węglowodanów, które zakwaszają medium, co powoduje obrót wskaźnika pH.

Ze swej strony, rodzaj Shigella i Salmonella nie są w stanie fermentować do żadnego z obecnych węglowodanów, używając tylko peptonów jako źródła energii, które alkalizuje środowisko, a zatem jego kolonie są niebiesko-zielone.

Również w tym medium można wyróżnić bakterie zdolne do tworzenia siarkowodoru (bezbarwny gaz). Tiosiarczan sodu działa jako źródło siarki, podczas gdy cytrynian żelaza jest środkiem ujawniającym. Oba związki umożliwiają tworzenie czarnego osadu siarczku żelaza, który świadczy o reakcji.

Czarny osad w centrum kolonii z przezroczystym halo wokół nadaje rybie oko. Ta cecha sugeruje obecność rodzaju Salmonella.

Na koniec chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną, a agar daje stałą konsystencję pożywce.

Przygotowanie

Odważyć 76 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Energicznie wstrząsnąć mieszanką, a następnie odstawić na 10-15 minut. Może być ogrzewany i gotowany, dając ruchy obrotowe aż do całkowitego rozpuszczenia. To medium nie jest autoklawowane.

Gdy medium osiągnie temperaturę około 45 ° C, objętość 20 ml jest bezpośrednio wlewana do sterylnych płytek Petriego..

Agar pozostawia się do zestalenia. W tym czasie są gotowe do użycia. Zaleca się ich natychmiastowe użycie. Jeśli nie są możliwe, powinny być przechowywane w lodówce, dopóki nie zostaną użyte.

Płytki należy usunąć wcześnie z lodówki przed posadzeniem ich w celu uzyskania temperatury pokojowej.

PH pożywki powinno wynosić 7,5 ± 0,2. Kolor odwodnionego podłoża jest purpurowy i przygotowany jest brązowozielony.

Użyj

Zaleca się stosowanie agaru Hektoen w poszukiwaniu bakterii z rodzaju Shigella i Salmonella w próbkach stolca i żywności..

Możliwość izolacji tych bakterii jest znacznie zwiększona, jeśli próbka jest wcześniej wzbogacona w specjalne buliony, takie jak bulion seleninowy, bulion seleninowo-cystynowy, bulion tetrationianowy itp..

Inokulum musi być mocne, a wysiew odbywa się poprzez prążkowanie. Płytki inkubuje się w 37 ° C przez 24 do 48 godzin w aerobiozie.

Zaleca się inkubację przez 48 godzin, ponieważ charakterystyka kolonii jest wyraźniejsza dla ich interpretacji i różnicowania w tym czasie.

Kontrola jakości

Aby przeprowadzić kontrolę jakości na tym podłożu, stosuje się certyfikowane szczepy bakteryjne, takie jak: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 i Shigella sonnei ATCC 25931.

Oczekiwane wyniki są następujące: Salmonella typhimurium i  Salmonella enteritidis muszą rozwinąć zielono-niebieskie kolonie z lub bez czarnego środka. Podczas gdy gatunki Shigella będą rosły jako niebiesko-zielone kolonie.

Możesz także dołączyć szczepy Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

W tych przypadkach obserwowane cechy są następujące: E. coli i K. pneumoniae W tym podłożu rozwiną się kolonie łososiowo-pomarańczowe, z osadami tego samego koloru wokół nich. Tymczasem Proteus rozwinie niebiesko-zielone kolonie z lub bez czarnego środka.

Podczas gdy S. aureus i  E. faecalis czasami powinno być zahamowane E. faecalis udaje się rosnąć jako żółte kolonie, bardzo małe.

Z drugiej strony, ponieważ to medium nie jest sterylizowane w autoklawie, ważne jest, aby ocenić sterylność pożywki. Dlatego każda przygotowana partia powinna być inkubowana od jednej do dwóch płytek bez zaszczepiania w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Oczywiście oczekuje się, że na talerzu nie będzie żadnego wzrostu.

Ograniczenia

-Gatunki Proteus mogą rozwijać się w tym środowisku, a cechy ich kolonii można pomylić z gatunkami Salmonella lub Shigella. Z tego powodu każdą podejrzaną kolonię należy potwierdzić testami biochemicznymi.

-Konieczne jest dołączenie tego podłoża do innych mniej selektywnych agarów, ponieważ jeśli poszukiwany mikroorganizm zostanie znaleziony w niskich stężeniach, może nie rozwinąć się w tym podłożu.

-Nie przegrzewać podczas przygotowywania, ponieważ nadmierne ciepło zmienia skład medium.

-Niezwykle widoczne mogą być kolonie Salmonelli fermentujące laktozę.

Referencje

  1. Twórcy Wikipedii. Hektoen agar dojelitowy. Wikipedia, wolna encyklopedia. 13 marca 2019, 23:38 UTC. Dostępny pod adresem: .wikipedia.org / Accessed 16 marca 2019.
  2. Laboratoria BD BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Dostępny pod adresem: bd.com
  3. Laboratories Britania. Hektoen Enteric Agar. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Dostępne na: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. Druga edycja. Dostępne w: bd.com/europe