Agar Fundacja Endo, przygotowanie i zastosowanie

The Agar Endo lub medium Endo jest stałym, zróżnicowanym podłożem hodowlanym o pewnym stopniu selektywności. Pierwotna formuła została stworzona przez Endo w 1904 r. W celu odróżnienia bakterii fermentujących laktozę od bakterii niefermentujących. Na początku został zaprojektowany do izolacji Salmonella typhi, ale później celem medium było poszukiwanie bakterii z grupy coli.

Zasada działania agaru Endo została zachowana, ale jego formuła uległa niezliczonym zmianom na przestrzeni lat. Obecnie podłoże składa się z tkanki zwierzęcej trawionej peptydem, laktozy, wodorofosforanu dipotasu, siarczynu sodu, fuksyny zasadowej i agaru.

Główne zastosowanie pożywki wiąże się z izolacją i różnicowaniem Gram-ujemnych pałeczek należących do rodziny Enterobacteriaceae i innych pobliskich rodzin..

Przez długi czas był używany do wykrywania bakterii z grupy coli w próbkach wody, nabiału i żywności, ale obecnie stosowanie tego medium zostało zastąpione przez inne o podobnych funkcjach. Jednak niektóre laboratoria mikrobiologiczne używają tego agaru do izolacji Enterobacteriaceae z próbek pochodzenia klinicznego.

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 Agar Endo
  • 2.2 Wariant agar m-Endo
• 3 Użyj
• 4 Kontrola jakości
• 5 Ograniczenia
• 6 referencji

Fundacja

Agar Endo zawiera peptony, które służą jako źródło aminokwasów, azotu, węgla i energii, niezbędne do wzrostu mało wymagających mikroorganizmów.

Z drugiej strony, nieznacznie selektywny charakter agaru zapewnia dodatek siarczynu sodu i zasadowej fuksyny; oba składniki częściowo lub całkowicie hamują rozwój większości bakterii Gram-dodatnich.

Zróżnicowany charakter jest spowodowany obecnością fermentowalnego węglowodanu, który w tym przypadku jest laktozą i zasadową fuksyną, która służy również jako wskaźnik pH.

Bakterie Gram-ujemne, które rosną na tym agarze i są zdolne do fermentacji laktozy, będą tworzyć silne różowe kolonie; będąc patognomonicznym Escherichia coli tworzenie ciemnoczerwonych kolonii z zielonym metalicznym połyskiem opalizującym. Wynika to z wysokiej produkcji kwasów z fermentacji węglowodanów.

Należy zauważyć, że medium znajdujące się wokół kolonii również zamienia się w silny różowy kolor. Podczas gdy niefermentujące pałeczki Gram-ujemne laktozy tworzą jasnoróżowe kolonie podobne do średnich lub bezbarwnych.

Wodorofosforan dipotasowy równoważy pH podłoża, a agar jest składnikiem zapewniającym stałą konsystencję.

Przygotowanie

Agar Endo

Odważyć 41,5 grama odwodnionego podłoża i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Ogrzewać mieszaninę, często mieszając, aż do całkowitego rozpuszczenia podłoża. Sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C, pod ciśnieniem 15 funtów, przez 15 minut.

Po wyjęciu z autoklawu pozostawić do ostygnięcia do temperatury około 45-50 ° C, wstrząsnąć mieszaniną do homogenizacji przed podaniem. Wlać 20 ml do sterylnych szalek Petriego.

Pozwól płytkom zestalić się, odwrócić i przechowywać w pudełku lub owinąć ciemnym papierem przed przechowywaniem w lodówce. Bardzo ważne jest, aby chronić przygotowane podłoże przed bezpośrednim światłem. Zalecaną praktyką jest przygotowanie dokładnej ilości, która będzie potrzebna.

W przypadku przechowywania w lodówce, płytki należy hartować przed użyciem.

PH pożywki powinno wynosić od 7,2 do 7,6, a kolor przygotowanego podłoża jest blado różowy..

Wariant agar m-Endo

Istnieje inna wersja agaru Endo (m-Endo), która jest zgodna z formułą McCarthy, Delaney i Grasso, która zawiera więcej związków i różni się sposobem przygotowania..

Wariant ten zawiera: laktozę, tryptozę, enzymatyczne trawienie kazeiny, enzymatyczne trawienie tkanki zwierzęcej, chlorek sodu, dwuzasadowy fosforan potasu, siarczyn sodu, ekstrakt drożdżowy, monozasadowy fosforan potasu, zasadową fuksynę, dezoksycholan sodu, siarczan laurylu sodu i agaru.

W tym przypadku ważymy 51 g odwodnionej pożywki i zawieszamy ją w 1 litrze wody destylowanej zawierającej 20 ml etanolu.

Podgrzać lekko mieszając, aż medium całkowicie się rozpuści. Nie przegrzewać i nie sterylizować w autoklawie. Gdy mieszanina jest jednorodna, podawaj w sterylnych szalkach Petriego i pozostaw do zestalenia.

Użyj

W niektórych krajach jest nadal używany do liczenia bakterii coli ogółem i kałowych w próbkach wody i żywności, zwłaszcza w obecności Escherichia coli jako główny wskaźnik zanieczyszczenia kałowego.

Agar M-Endo jest zalecany przez Amerykańskie Stowarzyszenie Zdrowia Publicznego (APHA) do monitorowania i kontroli programów dezynfekcji i oczyszczania ścieków, a także do oceny jakości wody pitnej.

Najczęściej stosowaną metodą jest filtracja membranowa, po wzbogaceniu próbki w bulion siarczanu Laurylu przez 2 do 4 godzin.

Może być również stosowany jako substytut agaru EMB w analizie mikrobiologicznej żywności i wody za pomocą najbardziej prawdopodobnej techniki numerycznej (NMP), szczególnie w pełnej fazie potwierdzającej w celu potwierdzenia obecności E. coli z mętnych bulionów EC.

Kontrola jakości

Aby ocenić jakość przygotowanej partii agaru Endo, wysiewa się znane lub certyfikowane szczepy kontrolne.

Wśród szczepów, które można wykorzystać do tego celu, są: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 i Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Szczepy wysiewa się przez wyczerpanie i inkubuje w 37 ° C przez 24 godziny w aerobiozie.

Oczekiwane wyniki to:

• Do Escherichia coli: kolonie silne czerwone, z metalicznym połyskiem.
• Do E. cloacae i K. pneumoniae kolonie powinny być różowe śluzowe.
• W przypadku S. typhimurium, S. flexneri i P. mirabilis kolonie są zazwyczaj jasnoróżowe lub bezbarwne.
• Wreszcie, E. faecalis oczekuje się, że będzie częściowo zahamowany, dlatego jego wzrost powinien być słaby przy bardzo małych koloniach mocnego różu.

Ograniczenia

-Medium Endo ma niską selektywną moc, dlatego możliwe jest, że niektóre drobnoustroje Gram-dodatnie, takie jak Staphylococcus, Enterococcus, a nawet drożdże, mogą rosnąć.

-Inne prątki nie należące do rodziny Enterobacteriaceae mogą rozwijać się w tym podłożu, jak na przykład Pseudomonas sp i Aeromonas sp. Charakterystyczne dla tych szczepów są bezbarwne nieregularne kolonie.

-Przygotowane medium jest bardzo wrażliwe na światło, dlatego długotrwałe narażenie na to pogarsza system wskaźników, nieodwracalnie uszkadzając podłoże.

-Składniki podłoża są uważane za rakotwórcze, dlatego należy unikać bezpośredniego kontaktu.

-Odwodnione podłoże jest bardzo higroskopijne i powinno być przechowywane w oryginalnym pojemniku w temperaturze pokojowej, szczelnie zamknięte iw suchym środowisku.

Referencje

1. Laboratoria BD Agar Endo. 2013. Dostępny pod adresem: bd.com
2. Neogen Laboratories M Agar Endo. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
3. „Agar Endo”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 7 września 2017 r., 08:27 UTC. 28 lutego 2019, 22:55. Dostępne w: en.wikipedia.
4. Laboratorium Merck. Agar Endo 2019. Dostępny pod adresem: merckmillipore.com
5. Karta techniczna laboratoriów. M-Endo Agar LES. 2015. Dostępny na: liofilchem.net