Fundacja Agar CLED, zastosowania i przygotowanie



The Agar CLED (Cystine-Lactose-Electrolytes-Deficient) jest różnicową stałą pożywką hodowlaną, stosowaną do diagnozowania zakażeń dróg moczowych. Skład pożywki hodowlanej jest przeznaczony do dobrego wzrostu patogenów moczowych i jest idealny do oznaczania ilościowego jednostek tworzących kolonie (CFU).

Podłoże hodowlane CLED jest nieselektywne, ponieważ mogą w nim rosnąć drobnoustroje Gram-ujemne, a także Gram-dodatnie. Ale to nie jest problem, ponieważ większość infekcji dróg moczowych jest spowodowana przez jeden typ mikroorganizmu.

W przypadku zakażeń drobnoustrojami można uzyskać 2 lub 3 różne bakterie, ale jest to bardzo rzadkie i przez większość czasu są to próbki zanieczyszczone.

Wśród bakterii Gram-ujemnych, które mogą rosnąć w tym podłożu, znajdują się prątki należące do rodziny Enterobacteriaceae i inne pałeczki jelitowe, uropatogeny są najczęściej izolowane w próbkach moczu, co następuje: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, między innymi.

Podobnie wśród bakterii Gram-dodatnich, które mogą rosnąć w tym podłożu, są Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp i mogą nawet hodować drożdże, jak kompleks Candida albicans.

Jednak ze względu na skład chemiczny medium nie pozwala na wzrost niektórych wymagających patogenów układu moczowo-płciowego, takich jak Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella pochwy, między innymi.

Indeks

  • 1 Podstawa agaru CLED
  • 2 Podstawa agaru CLED (Bevis)
  • 3 zastosowania
    • 3.1 Wysiew próbek moczu
    • 3.2 Interpretacja
    • 3.3 Identyfikacja
  • 4 Przygotowanie
  • 5 referencji

Założenie agaru CLED

Pożywka CLED ma jako źródło energii ekstrakt mięsny, hydrolizat trzustkowy kazeiny i hydrolizat żelatyny. Dostarczają składników odżywczych dla rozwoju mało wymagających bakterii.

Zawiera także cystynę, aminokwas, który pozwala na wzrost bakterii z grupy coli, wyróżniający się niewielkimi rozmiarami.

Podobnie laktoza zawiera węglowodany ulegające fermentacji, z tego powodu podłoże to jest zróżnicowane; możliwość odróżnienia bakterii fermentujących od niefermentującej laktozy.

Bakterie fermentujące zmieniają pH pożywki poprzez wytwarzanie kwasów, rozwijając żółte kolonie, podczas gdy bakterie niefermentujące nie generują zmian w podłożu, dlatego przyjmują zabarwienie oryginalnego agaru, koloru zielonego.

Reakcja fermentacji ujawnia się dzięki obecności wskaźnika pH, który w tej pożywce jest błękitem bromotymolowym.

Z drugiej strony, niskie stężenie elektrolitu w medium hamuje typowy inwazyjny wzrost rodzaju Proteus, zwany efektem roju. Generuje to przewagę w stosunku do innych środków, ponieważ pozwala na zliczanie UFC, w tym jeśli obecny jest rodzaj Proteus.

Jednak niskie stężenie elektrolitów hamuje wzrost niektórych gatunków z rodzaju Shigella, jest to wada w stosunku do innych środków.

Podstawa agaru CLED (Bevis)

Istnieje wariant lub modyfikacja tego medium stworzona przez Bevisa, który włączył oryginalną kompozycję kwasu fuksyny (wskaźnik Andrade) do oryginalnej kompozycji. Działa razem z błękitem bromotymolowym w celu odróżnienia fermentacji od bakterii niefermentujących.

Różnica między medium konwencjonalnym a zmodyfikowanym jest kolorem przyjętym przez kolonie. W przypadku bakterii fermentujących laktozę kolonie uzyskują czerwonawo-pomarańczowy kolor z różowym lub czerwonym halo, podczas gdy niefermentujące są niebieskawo-szare..

Używa

Agar CLED jest używany wyłącznie do siewu próbek moczu. Wykorzystanie tego medium jest szczególnie częste w laboratoriach europejskich, podczas gdy w Ameryce jest mniej używane.

Zbieranie próbki musi spełniać pewne parametry, aby uzyskać wiarygodne wyniki, w tym:

  • Nie przyjmowanie antybiotyków przed pobraniem próbki.
  • Najlepiej przyjmować mocz od pierwszej godziny rano, ponieważ jest bardziej skoncentrowany, gdy nie można pobrać próbek metodami inwazyjnymi.
  • Dokładnie umyć narządy płciowe przed pobraniem próbki.
  • Odrzuć pierwszy strumień moczu, a następnie umieść pojemnik.
  • Zebrać od 25 do 30 ml moczu w sterylnych etykietowanych pojemnikach.
  • Natychmiast udaj się do laboratorium otoczonego lodem.
  • Musi być przetworzony przed 2 godzinami emisji lub schłodzony w 4 ° C przez maksymalnie 24 godziny.

Wysiew próbek moczu

Próbka moczu musi być rozcieńczona 1:50.

W celu rozcieńczenia umieścić 0,5 ml moczu pacjenta i rozcieńczyć 24,5 ml sterylnego roztworu fizjologicznego.

Zmierzyć 0,1 ml rozcieńczonego moczu i lochy na powierzchnię za pomocą szpatułki drigalskiej na podłożu CLED. Jest to metoda wysiewu wskazana do liczenia kolonii. Dlatego jest stosowany w próbkach moczu, ponieważ wyniki muszą być wyrażone w CFU / ml.

Aby określić ilościowo uzyskane kolonie, postępuj w następujący sposób: policz kolonie płytki i pomnóż przez 10, a następnie przez 50. W ten sposób otrzymasz ilość CFU / ml moczu.

Interpretacja

Liczenie powyżej 100 000 CFU / ml - zakażenie dróg moczowych Indica

Liczenie poniżej 1000 CFU / ml - Brak infekcji

Liczenie między 1000-10 000 CFU / ml - Poufne, możliwe zanieczyszczenie, powtórzenie pobierania próbek.

Identyfikacja

Kolonie wyhodowane na agarze CLED powinny być wytworzone metodą Grama i w zależności od cech morfotypowych mikroorganizmu wykonywana jest pewna subkultura.

Na przykład, jeśli jest to Gram-ujemny Bacillus, zostanie wysiany na agarze MacConkey, gdzie potwierdzona jest fermentacja laktozy lub jej brak. Ponadto dołączany jest pożywny agar w celu przeprowadzenia testu oksydazy.

W przypadku, gdy Gram ujawnia ziarniaki Gram-dodatnie, można go hodować w słonym agarze z mannitolem iw agarze odżywczym. W tym ostatnim przeprowadza się test katalazy. Wreszcie, jeśli zaobserwuje się drożdże, zostanie zasiane na agarze Sabouraud.

Wiele laboratoriów eliminuje stosowanie medium CLED i woli używać tylko agaru z krwią, MacConkeya i agaru odżywczego do wysiewania próbek moczu.

Przygotowanie

W fiolce z jednym litrem wody destylowanej rozpuść 36,2 g sproszkowanego agaru CLED. Po 5 minutach odpoczynku ogrzać ponownie zawieszony agar, mieszając stale aż do wrzenia przez 1 minutę.

Następnie sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut. Po upływie czasu usuwa się go z autoklawu i pozostawia do ostygnięcia do osiągnięcia temperatury 45 ° C. Następnie podawano od 15 do 20 ml na każdą sterylną szalkę Petriego.

Procedura podawania talerzy musi być przeprowadzona wewnątrz kaptura z przepływem laminarnym lub przed palnikiem Bunsena, aby uniknąć zanieczyszczenia.

Podawane płytki pozostawia się do zestalenia, zamawia się w uchwycie na płytki odwróconym i przechowuje w lodówce (2-8 ° C) aż do użycia.

Końcowe pH przygotowanego podłoża powinno wynosić 7,3 ± 0,2.

Referencje

  1. Zalecenia dotyczące diagnostyki mikrobiologicznej zakażenia dróg moczowych. chil infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Dostępne pod adresem: scielo.org.
  2. Panchi J. Identyfikacja środka bakteryjnego powodującego zakażenia układu moczowego u pacjentów wewnętrznych poddawanych cewnikowaniu pęcherza moczowego. 2016. Praca licencjacka ubiegać się o tytuł licencjata w laboratorium klinicznym. Uniwersytet Techniczny w Ambato. Ekwador.
  3. Laboratories Britania. Pół CLED. Dostępne pod adresem: britanialab.com.
  4. Renylab Laboratories Instrukcja użytkowania, Agar CLED. 2013 Dostępne na stronie: www.renylab.ind.br.
  5. Cultimed Laboratories Podstawowy podręcznik mikrobiologii. Dostępne pod adresem: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Opcja agaru CLED w rutynowej kulturze moczu. Ocena prospektywna i porównawcza. Diagnostic Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Usługa publikacji UCA.