Podstawa czekolady agarowej, zastosowania i przygotowanie



The agar czekoladowy jest to stała, wzbogacona, nieselektywna i nieróżnicowa pożywka hodowlana. Służy głównie do izolacji mikroorganizmów wymagających pod względem odżywczym, chociaż może hodować dowolny rodzaj bakterii.

Dlatego jego użyteczność wzrasta zwłaszcza w przypadku wysiewu próbek, które są normalnie sterylne, takie jak płyn mózgowo-rdzeniowy i płyn stawowy. Chociaż jest on również włączony w środki wybrane do siewu próbek polimikrobowych, ale w tych przypadkach konieczne jest dodanie antybiotyków, które hamują towarzyszącą florę.

Medium to ma charakterystyczny brązowy kolor bardzo podobny do czekolady, stąd jego nazwa. Preparat jest bardzo podobny do agaru z krwią, tylko w tym przypadku krew musi zostać podgrzana, aby czerwone krwinki się załamały.

Jego przygotowanie, podobnie jak agar z krwią, jest bardzo delikatne, ponieważ łatwo się zanieczyszcza. Z tego powodu wiele laboratoriów woli nabyć to medium już przygotowane przez domy komercyjne, które gwarantują ich jakość.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 zastosowania
    • 2.1 Agar czekoladowy przygotowany z agarem Columbia
    • 2.2 Agar czekoladowy przygotowany z agarem bazowym GC (dla gonokoków)
    • 2.3 Agar czekoladowy przygotowany z agarem Müeller Hinton
    • 2.4 Agar czekoladowy przygotowany z agarem Thayer Martin
  • 3 Przygotowanie
    • 3.1 Obliczenia
    • 3.2 Zważyć i rozpuścić
    • 3.3 Sterylizacja
    • 3.4 Agregacja krwi
    • 3.5 Inny sposób przygotowania agaru czekoladowego bez użycia krwi
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 referencji

Fundacja

To podłoże składa się z bazy agaru bogatego w składniki odżywcze i podgrzaną krew. Hemoliza czerwonych krwinek zapewnia współczynnik X (hemin) i czynnik V (NAD), które są niezbędne do wzrostu niektórych mikroorganizmów, takich jak rodzaj. Haemophilus. Jest również bardzo przydatny do izolacji Neisserias sp.

Podobnie jak agar z krwią, różne podłoża można stosować jako agar bazowy w zależności od potrzeby. Wśród użytych pożywek są wlew serca do mózgu i agar sojowy tryptozowy, chociaż najbardziej zalecane są agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC i agar Thayer Martin..

Niektóre warianty agaru czekoladowego obejmują dostępny w handlu wzbogacony suplement Isovitalex lub Polivitex.

Te suplementy zawierają witaminę B12, L-glutamina, adenina, chlorowodorek guaniny, kwas p-aminobenzoesowy, dinukleotyd nikotynamidoadeninowy (NAD), pirofosforan tiaminy, azotan żelaza, chlorowodorek tiaminy, chlorowodorek cysteiny, L-cystyna i glukoza.

Ważne jest, aby pamiętać, że agar czekoladowy jest bardziej wzbogacony niż agar z krwią, ale nie pozwala na obserwację wzorów hemolizy.

Używa

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Columbia

Pożywka zawiera strawiony trzustką kazeinę i serce, strawiony peptyd mięsny, chlorek sodu, agar, ekstrakt drożdżowy i skrobię kukurydzianą. Jest również bogaty w witaminy, minerały i niezbędne aminokwasy.

Ta baza z podgrzaną krwią jest idealna do izolacji bakterii z rodzaju Neisseria. Z drugiej strony, jeśli dodatek do Brucelli zostanie dodany do pożywki, wspomniany mikroorganizm może zostać wyizolowany. Wyniki są lepsze dzięki krwi końskiej.

Agar czekoladowy przygotowany z agarem bazowym GC (dla gonokoków)

Pożywka ta zawiera peptony, skrobię kukurydzianą, bufory jednozasadowe i dwuzasadowe, chlorek sodu i agar.

Większość przygotowywanych na rynku prezentacji agaru czekoladowego zawiera tę bazę i nie zawiera ogrzanej krwi, ale syntetyczną mieszaninę hemin i chemicznego dodatku czynników wzrostu, witamin, minerałów, aminokwasów, czynnika V i glukozy..

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Müeller Hinton

Służy do wykonywania testu wrażliwości drobnoustrojów wymagających drobnoustrojów, takich jak Streptococcus pneumoniae przy użyciu 5% podgrzanej krwi barana.

Służy także do pierwotnej izolacji Neisserias i Haemophilus, ale w szczególnym przypadku izolacji Haemophilus preferowane jest użycie krwi końskiej, ponieważ jest bogatym źródłem czynnika X i V.

Z drugiej strony, jeśli próbka do wysiewu pochodzi z obszaru niesterylnego, zaleca się dodanie antybiotyków w celu zahamowania normalnej flory tego obszaru..

Przykład dla próbek oddechowych, w których podejrzewa się obecność bakterii z rodzaju Haemophilus Bacytracyna jest stosowana do hamowania wzrostu Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus i Saprofityczna Neisseria.

W przypadku próbek z genitalia, gdzie podejrzewa się Haemophilus ducreyi, Z powodzeniem użyto agaru czekoladowego przygotowanego w następujący sposób: agar Müeller-Hinton z 5% czekoladowanej krwi końskiej, 1% wzbogacenia Isovitalex i 3 μg / ml wankomycyny.

Agar czekoladowy przygotowany z agarem Thayer Martin

To medium jest wyjątkowe dla izolacji Neisseria gonorrhoeae. Musi zawierać antybiotyki hamujące towarzyszącą florę. Używa się krwi jagnięcej.

Przygotowanie

Należy zapoznać się ze wskazówkami dotyczącymi przygotowania agaru bazowego do użycia. Są z tyłu opakowania z odwodnionym medium. Zazwyczaj opisują, ile należy zważyć, aby przygotować jeden litr pożywki hodowlanej.

W laboratorium można przygotować dokładnie potrzebną ilość, może to być więcej lub mniej niż jeden litr.

Obliczenia

Zasada trzech ma na celu obliczenie, ile należy zważyć, aby przygotować pożądaną objętość. Przykład:

Jeśli na 1 litr konieczne jest zważenie 40 gr, a laboratorium wymaga 800 ml, mówi się:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Wzór będzie następujący:

X = 32 gr (kwota do zważenia 800 ml).

Zważyć i rozpuścić

Kontynuujemy ważenie wymaganej ilości i umieszczamy ją w fiolce z wodą.

Podgrzać do umiarkowanego ciepła i delikatnie mieszać ruchami obrotowymi, aż odwodnione medium całkowicie się rozpuści, pozostawiając je do wrzenia przez 1 minutę.

Sterylizować

Fiola jest wprowadzana do autoklawu w celu sterylizacji pożywki w 121 ° C przez 20 minut.

Kruszywo krwi

Po wyjściu z autoklawu pozostawia się do odpoczynku, aż temperatura medium będzie w przybliżeniu między 56 a 70 ° C, aby umieścić krew i mieszać, aż medium stanie się brązowe.

Jeśli zamierzasz dodać suplementy, nadszedł czas, aby to zrobić. Następnie wymieszać i podać 20 ml do każdej sterylnej szalki Petriego.

Całą procedurę należy wykonać w komorze z przepływem laminarnym lub wokół palnika Bunsena.

Odstawić, aż się zestalą i utrzymać w lodówce.

Inny sposób przygotowania agaru czekoladowego bez użycia krwi

Pożywkę podstawową przygotowuje się w sposób opisany powyżej, otrzymaną komercyjnie odwodnioną hemoglobinę rozpuszcza się i sterylizuje w autoklawie.

Oba roztwory pozostawia się do ochłodzenia do 50 ° C, przyłącza i dodaje suplement. Mieszać w warunkach aseptycznych, a następnie podawać w sterylnych płytkach Petriego.

Kontrola jakości

Ważne jest, aby krew była umieszczana we wskazanej temperaturze, ponieważ idealnie jest lizować krwinki czerwone i jednocześnie utrzymywać współczynnik V, który jest wrażliwy na temperaturę.

Na powierzchni agaru nie powinno być żadnych pęcherzyków. Każda partia 100 płytek powinna być inkubowana w piecu w jednej lub dwóch płytach w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny, aby sprawdzić jego sterylność.

Aby uzyskać najlepsze wyniki, agar czekoladowy należy użyć wkrótce po przygotowaniu.

Kontrolne szczepy bakteryjne powinny być pobierane w laboratorium w celu oceny skuteczności świeżo przygotowanego podłoża do wzrostu głównych wymagających mikroorganizmów o znaczeniu klinicznym.

Referencje

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktyczna mikrobiologia kliniczna. University of Cadiz, 2. edycja. Usługa publikacji UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. (5 wyd.). Argentyna, redakcja Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Możliwość zastosowania podłoża hodowlanego podstawowego Agaru GC-Biocen w Laboratorium Mikrobiologicznym. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Dostępne w: scielo.sld.
  5. Twórcy Wikipedii. Agar czekoladowy. Wikipedia, wolna encyklopedia. 17 grudnia 2018, 19:54 UTC. Dostępne na: en.wikipedia.org.