Podłoże agarowe Cetrimida, przygotowanie, zastosowanie



The agar cetrimidowy lub cetrimid jest selektywną stałą pożywką hodowlaną, przeznaczoną do izolacji Pseudomonas aeruginosa. Opiera się on na podkreśleniu produkcji pigmentów charakterystycznych dla tego gatunku i został opracowany na podstawie modyfikacji agaru Tech, stworzonego przez Kinga, Warda i Raneya.

Oryginalna formuła zawierała sole chlorku magnezu, siarczan potasu, trawienie żelatyny trzustkowej i agar-agar. Modyfikacja formuły polegała na dodaniu cetrimidu (bromku cetylotrimetyloamoniowego) i glicerolu.

Agar cetrimidowy jest przydatny do badań mikrobiologicznych próbek, w których występuje Pseudomonas aeruginosa. Należy zauważyć, że bakteria ta ma ogromne znaczenie, ponieważ chociaż jest częścią normalnej mikrobioty środowiskowej, często zachowuje się jak oportunistyczny patogen..

Dlatego jednym z najczęstszych problemów powodowanych przez ten zarodek są zakażenia szpitalne, czyli takie, które występują w środowisku szpitalnym, atakując pacjentów z obniżonym układem odpornościowym..

Z drugiej strony, ze względu na powinowactwo tego mikroorganizmu do wilgotności, najbardziej narażonymi celami skażenia są: sprzęt do wspomaganego oddychania, leki, nebulizatory, źródła wody, klimatyzatory, środki dezynfekujące, roztwory mydła, roztwory do wstrzykiwania, otwarte rany , cewniki, cewniki moczowe, między innymi.

W tym sensie agar cetrimidowy jest przydatny do przeprowadzania kontroli mikrobiologicznych i upraw do elementów poprzednio wymienionych.

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Interpretacja
  • 2 Przygotowanie
  • 3 zastosowania
  • 4 Nasiona
  • 5 Ograniczenia
  • 6 Kontrola jakości
  • 7 referencji

Fundacja

Agar cetrimidowy opiera się na zdolności podłoża do pobudzania wzrostu P. aeruginosa, stymulować produkcję ich pigmentów, a tym samym hamować wzrost innych mikroorganizmów.

Właściwości te wynikają z funkcji, jaką spełnia każdy ze składników. Obecny pepton żelatynowy służy jako źródło azotu, witamin i minerałów. Glicerol lub gliceryna działa jako źródło węgla.

Ze swej strony cetrimid (bromek cetylotrimetyloamoniowy) jest substancją hamującą wzrost innych bakterii niż P. aeruginosa, w tym inne gatunki należące do tego samego rodzaju.

Hamowanie występuje, ponieważ cetramid działa jako detergent kationowy, destabilizując błonę plazmatyczną większości bakterii, z wyjątkiem P. aeruginosa i kilka innych, którym udaje się przeżyć.

Z drugiej strony zawiera chlorek magnezu i siarczan potasu. Związki te stymulują ekspresję fenotypową związaną z pojemnością Pseudomonas aeruginosa wytwarzania różnych pigmentów, w tym: pirocyjaniny, pioverdinu, piorubiny, piomelaniny i fluoresceiny. Wreszcie zawiera agar-agar, który nadaje mu stałą konsystencję.

Interpretacja

Interpretacja wzrostu uzyskanego w tym agarze odbywa się w następujący sposób:

Obserwacja okrągłych, gładkich kolonii o regularnych krawędziach, wytwarzających niebiesko-zielone, zielone, brązowe lub czerwonawe pigmenty, plus emisja owocowego zapachu (aminoacetofenonu), jest przypuszczalnym wynikiem obecności tej bakterii we wspomnianej próbce..

Z drugiej strony wskazuje na P. aeruginosa obserwacja jasnożółtozielonego pigmentu na koloniach, gdy płytka jest wystawiona na światło ultrafioletowe.

Należy zauważyć, że każdy obserwowany kolor jest spowodowany wytwarzaniem określonego pigmentu. Niebiesko-zielony pigment odpowiada wytwarzaniu pyocyjaniny, zieleni do pioverdinu, czerwonawej do piorrubiny, brązowej do piomelaniny i jasnej żółtawo-zielonej fluorescencji w świetle ultrafioletowym na fluoresceinę.

Przygotowanie

Odważ 43 g odwodnionego podłoża i rozpuść w wodzie destylowanej. Dodaj 10 ml glicerolu. Przenieść mieszaninę do źródła ciepła. Pozwól zagotować się przez kilka minut, aż do całkowitego rozpuszczenia.

Autoklawować w 121 ° C przez 15 minut. Pozostawić i podawać w sterylnych płytkach Petriego, gdy temperatura wynosi około 50 ° C.

Pozostawić do zestalenia, odwrócić, zamówić w plaquers i przechowywać w lodówce do czasu użycia. Aby posadzić płytki z agarem cetrimidowym, należy je wcześniej wyjąć z lodówki i pozostawić w temperaturze pokojowej..

Końcowe pH pożywki powinno wynosić 7,2 ± 0,2.

Kolor odwodnionego podłoża jest beżowy, a preparat jest nieprzezroczysty biały.

Używa

Agar cetrimidowy może być użyty do posadzenia wszystkich rodzajów próbek, w których występuje Pseudomonas aeruginosa. Dlatego jest przydatny we wszystkich dziedzinach mikrobiologii (ochrona środowiska, przemysł, klinika, woda i żywność).

Bardzo ważne jest analizowanie środowisk szpitalnych, a tym samym możliwość zastosowania mediacji korekcyjnych, ponieważ mikroorganizm dociera do pacjentów za pomocą sprzętu, leków, roztworów i skażonych materiałów eksploatacyjnych, które są używane przez pacjenta.

W ten sposób mikroorganizm może zainfekować dolne drogi oddechowe, drogi moczowe i rany pacjentów z obniżoną odpornością.

Można również liczyć kolonie P. aeruginosa w testach limitu mikrobiologicznego.

Zasiane

Agar cetrimidowy może być używany jako kultura podstawowa. Płytkę zaszczepia się na jednej z jej krawędzi, a stamtąd rozprowadza ją przez wyczerpanie do reszty płytki. Próbki cieczy można wysiewać na powierzchni za pomocą szpatułki drigalskiej.

Płytki inkubuje się w aerobiozie w 37 ° C przez 24 godziny inkubacji.

Ograniczenia

-Niewielki procent szczepów  Pseudomonas aeruginosa nie wytwarzaj pirocyjaniny, więc możesz interpretować fałszywy negatyw.

-Niektóre gatunki Pseudomonas o znaczeniu klinicznym są hamowane w tym podłożu.

-Pomimo przestrzegania opisanych cech Pseudomonas aeruginosa, muszą być potwierdzone dodatkowymi testami identyfikacyjnymi. Test, którego nie powinno zabraknąć, to test oksydazy, powinien być dodatni.

-Niektóre enterobakterie mogą rosnąć w tym podłożu i rozwijać żółty pigment, ale różni się od Pseudomonas aeruginosa w którym poddając płytkę promieniowaniu ultrafioletowemu nie ma fluorescencji.

-Serratia marcescens udaje się rozwinąć i produkuje różowy pigment.

-Jeśli płytki wysiane agarem cetrimidowym są eksponowane przez pewien czas w temperaturze pokojowej, szczepy P. aeruginosa mogą utracić fluorescencję obserwowaną w świetle ultrafioletowym, jednak właściwość odzyskuje się, jeśli jest ponownie inkubowana w 37 ° C.

Kontrola jakości

Aby przetestować prawidłowe działanie agaru cetrimidowego, można użyć szczepów kontrolnych, takich jak: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 i Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Oczekiwane wyniki to:

  • Do P. aeruginosa dobry wzrost, z niebiesko-zielonkawym pigmentem i dodatnią fluoresceiną.
  • S. maltophilia i S. aureus będzie częściowo lub całkowicie zahamowany.
  • Oczekuje się, że tak Escherichia coli być całkowicie zahamowany.

Referencje

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Charakterystyka fenotypowa i serologiczna izolatów klinicznych z Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratoria Conda Pronadisa. Baza agarowa cetrimidu. 2014. Dostępny na: condalab.com
  3. Laboratories Britania. Agar Cetrimida. 2015. Dostępny na: britanialab.com
  4. Laboratoria BD BD Pseudosel agar (agar Cetrimide). 2013. Dostępny pod adresem: bd.com
  5. Francisco Soria Melguizo Laboratory, C.A. Agar cetrimidowy. 2009. Dostępny pod adresem: http://f-soria.es