Podłoże, przygotowanie i zastosowanie Agar BHI



The Agar BHI lub agar infuzyjny Brain Heart to pożywna stała pożywka hodowlana. W języku hiszpańskim nazywamy to agarem z sercem do infuzji mózgowej. Jest to nieselektywna pożywka hodowlana, co oznacza, że ​​można rozwijać wszystkie rodzaje bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych, a także niektóre drożdże i grzyby nitkowate.

Składa się z infuzji mózgu i serca cielęciny, hydrolizatu trawiennego tkanek zwierzęcych, hydrolizatu trzustki kazeiny, chlorku sodu, glukozy, fosforanu disodu i agaru.

Należy zauważyć, że agar BHI jest jednym z najczęstszych podłoży hodowlanych w laboratoriach bakteriologicznych. Może być stosowany bez suplementów jako hodowla pierwotna, subkultura kolonii uzyskanych w innych pożywkach selektywnych lub do utrzymania szczepów w laboratorium.

Z drugiej strony jest to idealne podłoże do stosowania jako podstawa w przygotowaniu wzbogaconych pożywek, takich jak agar z krwią i agar czekoladowy. Oba są idealne do izolowania wymagających mikroorganizmów z żywieniowego punktu widzenia. Należy jednak wziąć pod uwagę, że ponieważ zawiera glukozę, nie jest wystarczające obserwowanie wzorców hemolizy.

Podobnie agar BHI można wykorzystać do przygotowania specjalnych środków do izolacji patogennych mikroorganizmów o trudnym wzroście na wspólnych podłożach, między innymi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae i Histoplasma capsulatum.

Z dodatkiem antybiotyku agar BHI staje się selektywnym podłożem do izolacji grzybów.

Indeks

  • 1 Fundacja
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 Kliny
    • 2.2 Płyty
    • 2.3 Przygotowanie agaru z krwią
  • 3 zastosowania
    • 3.1 Stosowanie bez dodatków
    • 3.2 Jako podstawowy agar do przygotowania innych mediów
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 referencji

Fundacja

Jest to pożywna pożywka hodowlana do izolowania umiarkowanie wymagających mikroorganizmów, która jest w stanie zwiększyć jej wzbogacenie dodatkiem krwi i innych suplementów diety.

Jest to nieselektywna pożywka hodowlana, dlatego umożliwia wzrost większości bakterii Gram-dodatnich i Gram-ujemnych, a także niektórych grzybów. Jednak może stać się selektywny dzięki dodaniu antybiotyków.

Pożywka zawiera infuzję mózgu i serca cielęcia, hydrolizat peptydowy z tkanek zwierzęcych i hydrolizat trzustkowy kazeiny; wszystkie te związki działają jako źródła witamin, aminokwasów, azotu i węgla.

Glukoza to węglowodan, który dostarcza mikroorganizmom energii po ich fermentacji. Podczas gdy chlorek sodu i fosforan disodu utrzymują równowagę osmotyczną i zapewniają pH zbliżone do neutralności. Na koniec agar daje stałą konsystencję pożywce.

Przygotowanie

Odważyć 52 gramy odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Doprowadzić mieszaninę do źródła ciepła, aż się zagotuje, często mieszając podczas procesu rozpuszczania.

Możesz przygotować kliny lub płytki agaru BHI bez dodatków.

Kliny

Do przygotowania klinów podawać preparat aż do napełnienia połowy każdej probówki, przykryć i wysterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut, gdy wychodzimy na podstawę, aż się zestalą. Następnie przechowuj w lodówce do momentu użycia.

Płyty

Rozpuszczoną mieszaninę autoklawuje się w 121 ° C przez 15 minut, po czym pozostawia się do ochłodzenia do 50 ° C i 20 ml pożywki podaje się w sterylnych szalkach Petriego. Dopuszcza się ich zestalenie, odwrócenie i przechowywanie w lodówce, dopóki nie zostaną użyte. Przed sadzeniem pozwól płytkom na osiągnięcie temperatury pokojowej.

PH pożywki powinno wynosić 7,4 ± 0,2.

Nieprzygotowany nośnik jest beżowy i przygotowany jest w jasnym bursztynie.

Przygotowanie agaru z krwią

Po sterylizacji pożywki, ochłodzić do temperatury około 45 do 50 ° C, w tym czasie dodać krew (50 ml), delikatnie wymieszać w celu homogenizacji i aseptycznie podawać 20 ml na każdą szalkę Petriego. Jeśli na płycie powstają pęcherzyki, płomień palnika powinien szybko przejść przez pęcherzyki, aby je wyeliminować.

Podobnie, specjalne media można przygotować dodając odpowiednie dodatki, gdy mieszanina osiągnie temperaturę od 45 do 50 ° C.

Medium jest wiśniowe.

Używa

Używaj bez dodatków

Agar BHI bez dodatków jest przydatny jako kultura podstawowa i do sadzenia czystych szczepów mikroorganizmów, które są średnio lub średnio wymagające do późniejszej identyfikacji.

Ponieważ jest to medium o jasnym zabarwieniu, idealnie nadaje się do obserwacji pigmentów, a także dlatego, że nie zawiera substancji zakłócających, może być stosowany do wykonywania testów biochemicznych, takich jak oksydaza i katalaza, lub do wykonywania innych testów biochemicznych z kolonii pochodzących z tego agar.

Podobnie kliny z agarem BHI są szeroko stosowane do utrzymania szczepów przez określony czas w laboratorium (bakterioteca).

Płytki lub kliny posadzone na powierzchni szczepami bakteryjnymi inkubuje się w 37 ° C przez 24 do 48 godzin. Podczas gdy w grzybach temperatura i czas inkubacji będą zależeć od rodzaju poszukiwanego grzyba.

Jako agar bazowy do przygotowania innych mediów

Dzięki tej bazie można przygotować wzbogacone i selektywne media.

Wzbogacony

Jego główną funkcją jest służenie jako podstawa do przygotowania agaru z krwią do rutynowego stosowania w laboratoriach mikrobiologicznych. W szczególności baza BHI sprzyja izolacji szczepów Streptococcus sp. Jednak ma tę wadę, że nie nadaje się do obserwacji wzorców hemolizy, ponieważ zawiera glukozę.

Stosuje się go również do przygotowania agaru z krwią lub krwią do izolacji Haemophilus sp. Aby uzyskać lepsze wyniki, możesz dodać suplement wzbogacający (IsoVitaleX).

Jeśli próbki pochodzą z dróg oddechowych do agaru, można dodać bacytracynę, aby zahamować towarzyszącą florę i zwiększyć prawdopodobieństwo odzyskania szczepów Haemophilus sp.

Z drugiej strony agar z krwią (jagnięcina lub człowiek) można przygotować z cystyną tellurynową w celu wyizolowania Corynebacterium diphtheriae. Podobnie przydatne jest przygotowanie agaru z krwią króliczą z dodatkiem cystyny ​​i glukozy w celu izolacji Francisella tularensis.

Wysiewanie płytek agarowych z krwią wykonuje się przez wyczerpanie i inkubuje w 35-37 ° C przez 24-48 godzin w mikroaerofilach (5-10% CO)2).

Selektywny

To podłoże z dodatkiem antybiotyków może zastąpić agar Sabourauda do izolacji grzybów.

Połączenie agaru BHI z chloramfenikolem - gentamycyną lub penicyliną -, streptomycyną i krwią końską idealnie nadaje się do izolacji Histoplasma capsulatum.

W zależności od mikroorganizmu, który ma być wyizolowany, zaleca się inkubację w aerobiozie w temperaturze 35-37 ° C lub w temperaturze pokojowej. Czasami konieczna jest inkubacja w obu zakresach temperatur, wykorzystując do tego 2 płytki.

Niektóre grzyby lubią Trichophyton mentagrophytes należy je inkubować w temperaturze pokojowej do 7 dni.

Kontrola jakości

Z każdej przygotowanej partii zaleca się inkubację 1 płytki lub klina w temperaturze 37 ° C przez 24 godziny i sprawdzenie, czy nie ma wzrostu; Szczególnie ważne przy przygotowywaniu agaru z krwią, ponieważ jest to łatwo zanieczyszczone medium.

Z drugiej strony jakość podłoża można ocenić przez zaszczepienie znanych lub certyfikowanych szczepów standardowych i obserwację ich rozwoju.

W tym sensie, aby ocenić agar BHI bez dodatków, szczepów Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 lub Candida albicans ATCC 10231. Inkubuje się w 37 ° C w aerobiozie przez 24 do 48 godzin. We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego wzrostu.

Aby ocenić płytki agarowe krwi, szczepy  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 lub Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Szczepy bakteryjne inkubuje się w 37 ° C w mikroaerofilach przez 24 godziny, podczas gdy grzyb jest inkubowany w temperaturze pokojowej w wilgotnej komorze do 7 dni. We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego wzrostu.

Referencje

  1. Laboratories Britania. Agar do infuzji Brain Heart. 2015. Dostępny na: britanialab.com.
  2. Laboratoria BD Agar Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Dostępny pod adresem: bd.com.
  3. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Brain Heart Infusion Agar. 2009.
  4. Neogenowe laboratorium. Brain Heart Infusion Agar. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar: podstawa, zastosowania i przygotowanie. 2018. Dostępny pod adresem: lifeder.com.
  6. Twórcy Wikipedii. Wlew serca do mózgu Wikipedia, wolna encyklopedia. 19 września 2018, 03:58 UTC. Dostępne na: wikipedia.org. Dostęp 2 marca 2019 r.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.