Podkład, przygotowanie i stosowanie Baird Parker Agar

The Agar Bairda Parkera jest to stała, selektywna i zróżnicowana pożywka hodowlana. Został utworzony w 1962 r. Do wykrywania i koagulazo-dodatniego liczenia gronkowców (Staphylococcus aureus).

Składa się z hydrolizatu trzustkowego kazeiny, ekstraktu mięsnego, ekstraktu drożdżowego, chlorku litu, glicyny, pirogronianu sodu, telluru potasu, agaru i emulsji żółtka jaja.

Agar Baird Parker opiera się na zdolności S. aureus redukcji tellurynu i produkcji lecytynazy. Obie właściwości generują kolonię o specyficznych cechach dla tego gatunku. Dlatego oferuje dużą skuteczność w wykrywaniu tego mikroorganizmu.

Typowe kolonie S. aureus są czarne lub ciemnoszare, z bezbarwną granicą i wyraźnym otoczeniem, które je otacza, odróżniając się od reszty mikroorganizmów. Ten patogen można znaleźć w próbkach klinicznych, wodach, kosmetykach i żywności surowej lub gotowanej.

Jego rozpoznanie lub wykrycie jest bardzo ważne ze względu na różnorodne patologie, takie jak zatrucie pokarmowe, zespół oparzonej skóry, zespół wstrząsu toksycznego, ropnie, zapalenie opon mózgowych, posocznica, zapalenie wsierdzia..

Indeks

• 1 Fundacja
  • 1.1 Moc żywieniowa
  • 1.2 Selektywne
  • 1.3 Różnicowy
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 Emulsja żółtka jaja
  • 2.2 Telluryn potasu przy 1% w / v
  • 2.3 Przygotowanie pożywki hodowlanej
• 3 Użyj
  • 3.1 Próbki kliniczne
  • 3.2 Próbki żywności
  • 3.3 Próbki wody
• 4 Kontrola jakości
• 5 zaleceń
• 6 referencji

Fundacja

Pożywna moc

Hydrolizat kazeinowy trzustki, ekstrakt mięsny i ekstrakt drożdżowy są źródłami składników odżywczych, witamin i minerałów niezbędnych do ogólnego rozwoju mikrobiologicznego, podczas gdy pirogronian i glicyna są związkami sprzyjającymi specyficznemu wzrostowi Staphylococcus aureus.

Selektywny

Agar Baird Parker jest selektywny, ponieważ zawiera substancje hamujące wzrost towarzyszącej flory, jednocześnie promując rozwój S. aureus. Związkami hamującymi są chlorek litu i telluryn potasu.

Różnicowy

Oznacza to, że można odróżnić S. aureus reszty gronkowców koagulazo-ujemnych. S. aureus ma zdolność redukcji telluru do czarnego metalicznego wolnego telluru, tworząc czarne lub ciemnoszare kolonie.

Podobnie żółtko jaja dostarcza substratów, aby udowodnić obecność enzymu lecytynazy i lipazy. S. aureus jest to dodatnia lecytynaza i dlatego wokół kolonii obserwuje się wyraźne halo, co wskazuje na hydrolizę lecytyny.

W tym sensie pojawienie się na tym agarze czarnych lub ciemnoszarych kolonii jasnych z lekką aureolą wokół wskazuje na obecność S. aureus. 

Jeśli tworzy się strefa wytrącania, wskazuje to na aktywność lipazy. Niektóre szczepy S. aureus są pozytywną lipazą i innymi negatywnymi.

W przypadku, gdy S. aureus Jeśli lipaza jest dodatnia, wokół czarnej lub ciemnoszarej kolonii zostanie zaobserwowana nieprzezroczysta strefa, a następnie przezroczyste halo z powodu działania lecytynazy..

Kolonie bakterii inne niż S. aureus zdolne do wzrostu w tym podłożu będą rozwijać bezbarwne lub brązowe kolonie, bez halo wokół.

Nietypowe czarne kolonie można również obserwować z bezbarwną granicą lub bez niej, ale bez wyraźnego halo. Kolonie te nie powinny być brane pod uwagę, nie odpowiadają S. aureus.

Przygotowanie

Emulsja żółtka jaja

Weź świeże jaja kurze, umyj je dobrze i umieść 2 do 3 godzin w 70% alkoholu. Następnie jajko otwiera się aseptycznie i białko jajka jest ostrożnie oddzielane od żółtka. Następnie pobiera się 50 ml żółtka i miesza z 50 ml jałowego roztworu fizjologicznego.

Telluryn potasu przy 1% w / v

Niektóre domy handlowe sprzedają 1% telluryn potasu gotowy do użycia. Jest dodawany do medium przed zestaleniem się medium.

Aby przygotować ten roztwór w laboratorium, zważ 1,0 g telluranu potasu i rozpuść w części wody. Następnie ilość wody jest uzupełniana do 100 ml. Roztwór musi być sterylizowany metodą filtracji.

Przygotowanie pożywki hodowlanej

Odważyć 60 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w 940 ml wody destylowanej. Pozostawić mieszaninę w spoczynku przez około 5 do 10 minut.

Zastosuj ciepło, często mieszając medium, aby poprawić proces rozpuszczania. Pozwól zagotować przez minutę. Sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut.

Odstawić, aż osiągnie temperaturę 45 ° C i dodać 50 ml emulsji żółtka jaja i 10 ml 1% tellurytu. Dobrze wymieszać i podawać 15–20 ml na sterylne płytki Petriego.

Pozostawić do zestalenia, uporządkować odwrócone w plaquers i przechowywać w lodówce do momentu użycia.

Końcowe pH przygotowanego podłoża powinno wynosić 6,8 ± 0,2.

Przed posadzeniem próbki poczekaj, aż płyta osiągnie temperaturę otoczenia. Zasiej płytki przez prążkowanie lub wysiewając na powierzchni szpatułką Drigalskiego.

Barwa odwodnionego podłoża jest jasnobrązowa, a kolor przygotowanego podłoża to jasny bursztyn.

Użyj

Próbki kliniczne

Próbki kliniczne wysiewa się bezpośrednio przez wyładowanie części materiału na jednym końcu płytki, a stamtąd przemieszcza się przez wyczerpanie. Inkubować przez 24–48 godzin w temperaturze 35–37 ° C.

Próbki żywności

Odważyć 10 g próbki żywności i homogenizować w 90 ml 0,1% wody peptonowanej, w razie potrzeby przygotowywać rozcieńczenia. Zaszczepić płytki w trzech powtórzeniach 0,3 ml przygotowanych roztworów i wysiać na powierzchnię za pomocą szpatułki Drigalskiego. Inkubować przez 24–48 godzin w temperaturze 35–37 ° C.

Ta metodologia pozwala policzyć typowe uzyskane kolonie i jest idealna, gdy obecność S. aureus powyżej 10 CFU na g / ml próbki.

Jeśli podejrzewasz, że kwota S. aureus jest niewielka lub występuje w nim dużo towarzyszącej flory, sugeruje się wzbogacenie próbki w bulionie sojowym z tryptykazą z 10% NaCl i 1% pirogronianu sodu. Sprzyja to wzrostowi S. aureus i będzie hamować rozwój towarzyszącej flory. Rurki, które są mętne, zostaną posiane na agarze Baird Parker.

Próbki wody

W systemie filtracji próżniowej i sterylizowanym, 100 ml wody jest filtrowane, a następnie mikroporowata membrana 0,4 mikrona jest usuwana za pomocą sterylnego zacisku i umieszczana na płytce Bairda Parkera. Inkubować przez 24–48 godzin w temperaturze 35–37 ° C. Ta technika pozwala na zliczanie typowych kolonii S. aureus.

Kontrola jakości

Aby ocenić jakość agaru Baird Parker, można zastosować znane szczepy, takie jak Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 lub Proteus mirabilis ATCC 43071.

W przypadku szczepów S. aureus Wiadomo, że ATCC redukuje telluryn i są one pozytywną lipazą i lecytynazą. Dlatego musi istnieć zadowalający rozwój i hodować wypukłe kolonie z czarnym środkiem i bezbarwną krawędzią, z nieprzezroczystą aureolą i innym halo bardziej zewnętrznie czystym.

Z drugiej strony S. epidermidis w tym środowisku oczekuje się słabego rozwoju, z koloniami szaro-brązowymi do czarnych, bez wyraźnego halo.

Do E. coli i P. mirabilis oczekuje się, że będzie całkowicie lub częściowo zahamowany. W przypadku wzrostu brązowe kolonie rozwiną się bez nieprzezroczystej strefy, ani wyraźnego halo.

Zalecenia

-Po dodaniu telluru i żółtka nie należy podgrzewać podłoża.

-Przygotowanie emulsji żółtka jaja i jej dodanie do pożywki jest bardzo wrażliwym etapem zanieczyszczenia. Należy zachować szczególną ostrożność.

-Jeśli występują typowe kolonie S. aureus musi zostać potwierdzony przez zamontowanie testu koagulazy na tym szczepie.

-Jeśli istnieją wątpliwości co do koagulazy, należy przeprowadzić inne testy potwierdzające.

-Uważaj, aby nie pomylić obecności typowych kolonii S. aureus z nietypowymi koloniami koloru czarnego.

Referencje

1. Twórcy Wikipedii. Agar Baird-Parker. Wikipedia, wolna encyklopedia. 15 marca 2017, 19:36 UTC. Dostępne pod adresem: wikipedia.org/ Dostęp 18 lutego 2019 r.
2. Laboratoria BD. Baird Parker Agar. 2006. Dostępny pod adresem: bd.com
3. Laboratories Britania. Baza agaru Bairda Parkera. 2015. Dostępny na: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Dostępne pod adresem: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratories Britania. Telluryn potasu. 2015. Dostępny na: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Staphylococcus aureus enterotoksynogenny typ A, w rozmazach nosogardzieli u osób zajmujących się żywnością. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Wenezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Jedzenie Izolacja i liczenie Staphylococcus aureus. Dostępne w:sencamer.gob.ve