Ujemne barwienie, technika, zalety i wady

The negatywne barwienie Jest to specjalna metoda barwienia, aby podkreślić obecność kapsułki w niektórych mikroorganizmach - głównie Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae i Cryptococcus neoformans-, z próbek klinicznych lub czystych kultur.

Bezpośrednią próbką powszechnie stosowaną do stosowania negatywnego barwienia jest płyn mózgowo-rdzeniowy. Ta technika stanowi szybką alternatywę dla przypuszczalnej diagnozy zapalenia opon mózgowych, zwłaszcza Cryptococcus neoformans.

Podobnie, bejca ta może być ogólnie stosowana na plwocinę i sterylne płyny, a także na szczepy uzyskane z młodych czystych kultur. Ta technika wykorzystuje nigrosine lub chiński atrament do jego wykonania; dlatego jest to bardzo prosta i ekonomiczna metodologia, która zapewnia informacje o dużej wartości diagnostycznej w krótkim czasie.

W tym sensie każde laboratorium jest w stanie wykonać to zabarwienie. Oczywiście laboratorium musi dysponować kompetentnym personelem, zdolnym rozpoznać drożdże Cryptococcus neoformans izolowane lub pączkujące i odróżniają je od leukocytów i artefaktów, które próbka może prezentować.

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Technika
  • 2.1 Materiały
  • 2.2 Specyfikacje pobierania próbek
  • 2.3 Wykonanie techniki z bezpośrednimi próbkami
  • 2.4 Wykonanie techniki ze szczepami z kultury
  • 2.5 Obserwacja w mikroskopie
• 3 zalety
• 4 Wada
• 5 Barwienie tkanek indyjskim tuszem
• 6 referencji

Fundacja

Nigrozyna i tusz indyjski działają w podobny sposób; dlatego każda z dwóch substancji może być stosowana zamiennie.

Ta technika jest nazywana barwieniem negatywnym, ponieważ działa przeciwnie do pozostałych technik barwienia. W tym, co pozostaje niezabarwione, znajduje się poszukiwana struktura, którą chcesz zobaczyć; to znaczy mikroorganizmy.

Dlatego zabarwienie polega na barwieniu dna rozmazu w ciemnym kolorze. W tym scenariuszu ograniczone struktury zostaną podświetlone w jasnym lub bezbarwnym kolorze.

Ogólnie, obserwuje się drożdże refrakcyjne, otoczone przezroczystym halo, które odpowiada kapsułce. Dzieje się tak, ponieważ chiński atrament i nigrosine są substancjami, które nie są w stanie przeniknąć polisacharydu, który tworzy kapsułkę żywych mikroorganizmów.

Warto zauważyć, że inne struktury, które mogą być obecne w próbce bezpośredniej, takie jak leukocyty lub krwinki czerwone, nie penetrują.

Teraz, jeśli mikroorganizmy są martwe, nalewka może przeniknąć do nich w taki sposób, że to zabarwienie jest również przydatne do oceny żywotności mikroorganizmów.

Technika

Materiały

Nigrosine

Nigrosine zawdzięcza swoją nazwę czarnemu kolorowi. Jest to syntetyczna substancja, która jest otrzymywana przez ogrzewanie mieszaniny związków organicznych - takich jak nitrobenzyna, anilina i chlorowodorek aniliny - przy użyciu katalizatora (żelaza lub miedzi) we wspomnianej reakcji..

Chiński atrament

Chiński atrament jest substancją używaną głównie przez Azjatów do pisania, tworzenia dzieł sztuki i malowania monochromatycznego. Jest bardzo popularny w kulturze chińskiej.

Otrzymywany jest z atramentu kałamarnicy zmieszanego ze sproszkowanym węglem, produktu spalania małych drzew żywicznych.

Możliwe jest również przygotowanie go z sadzy ze spalania węglowodorów (oleje roślinne), wraz z żelatyną białkową, która nadaje mu odpowiednią konsystencję, aby zapobiec wytrącaniu się cząstek węgla.

Specyfikacje pobierania próbek

- Nie wymaga postu.

- Próbka płynu mózgowo-rdzeniowego, plwociny lub sterylnej cieczy musi zawierać co najmniej 1 ml objętości i musi być natychmiast przeniesiona do laboratorium w temperaturze pokojowej.

- Płyn mózgowo-rdzeniowy i jałowe próbki płynu powinny być pobierane przez wyspecjalizowanego lekarza.

- Może to być również czysta kultura podejrzanego szczepu powiązanego z wyżej wymienionymi patogenami.

Wykonanie techniki z bezpośrednimi próbkami

- Próbki należy odwirować, a następnie supernatant odrzuca się i osad pobiera.

- Kroplę odwirowanego materiału (osadu) i kroplę chińskiego atramentu lub nigrozyny umieszcza się na czystym szkiełku..

- Powinien być dobrze wymieszany i pokryty szkiełkiem nakrywkowym, pozwalając kropli rozłożyć się jak cienka warstwa bez przekraczania krawędzi.

- Następnie preparat jest montowany w mikroskopie.

- Jeśli preparat jest zbyt ciemny, można go rozcieńczyć wodą.

Wykonanie techniki ze szczepami z kultury

- Bardzo mała część młodych plonów jest pobierana igłą do wysiewu i rozpuszczana w kropli chińskiego atramentu wcześniej umieszczonej na czystym szkiełku.

- Na wierzchu znajduje się szkiełko nakrywkowe.

- Obserwuje się to pod mikroskopem przy 10X, a następnie przy 40X.

Można również rozpuścić część kolonii w wodzie destylowanej, a stamtąd upuścić kroplę i wymieszać ją z tuszem. W ten sposób preparat nie będzie tak gruby, co umożliwi obserwację struktur w izolacji; Jeśli są aglomeracje, nie będą dobrze obserwowane.

Inna metodologia jest następująca:

- Umieść kroplę kultury w zawiesinie na jednym końcu szkiełka.

- Umieść kroplę nigrosine na tym samym końcu i wymieszaj.

- Z pomocą innego szkiełka, przedłużyć próbkę, jakbyś robił rozmaz hematologiczny.

- Pozostaw do wyschnięcia i obserwuj pod mikroskopem.

Obserwacja w mikroskopie

Najpierw musisz skupić się na celu 10X, aby mieć szeroki widok pola. Następnie powinieneś wyszukać, czy są wolne przestrzenie; jeśli są, skup się na 40X, aby zobaczyć szczegóły.

Zalety

- Jest łatwy do wykonania.

- To technika ekonomiczna.

- Ta metoda nie wymaga, aby rozmaz był przymocowany do ciepła lub chemikaliów; dlatego mikroorganizmy są obserwowane bez zniekształceń.

- Świeży preparat nie wymaga suszenia, więc można go natychmiast zaobserwować, generując szybko wyniki.

Wada

Po zmontowaniu świeże preparaty należy natychmiast obserwować; Jeśli wolno im wyschnąć, nie jest już możliwe ich obserwowanie i nowe.

Barwienie tkanek indyjskim tuszem

Inną funkcją, jaką chiński atrament może spełnić, są laboratoria patologii. Jest on stosowany do próbek tkanek usuniętych chirurgicznie w celu zaznaczenia marginesów resekcji guza.

Zaznaczoną tkankę natryskuje się kwasem octowym. Działa jak zaprawa i zapobiega odrywaniu się atramentu, gdy tkanka jest poddawana rutynowej obróbce w celu przygotowania biopsji.

Procedura polega na kąpieli tkanki alkoholem i ksylenem, a następnie nasączaniu woskiem parafinowym. To oznaczenie prowadzi patologa podczas obserwacji tkanki, wskazując, gdzie znajduje się margines resekcji chirurgicznej lub inny punkt zainteresowania.

Referencje

1. „Nigrosina”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 11 lipca 2017 r., 22:46 UTC. 6 stycznia 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. „Chiński atrament”. Wikipedia, darmowa encyklopedia. 1 października 2018, 03:08 UTC. 6 stycznia 2019, 18:20: en.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J i współpracownicy. (2006). Personel roboczy wspólnoty autonomicznej Estremadura. Szczegółowy program Tom IV. Redakcja MAD. Sewilla-Hiszpania, s. 211–212.
4. Silva M., García M., Corrales J., Ponce E. (2006). Specjalistyczny technik laboratoryjny Galicyjskiej Służby Zdrowia (SERGAS). Zakres tematyczny tom 2. Redakcja MAD. Sewilla-Hiszpania, str. 79–80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Argentyna Panamericana S.A Editorial