Co to jest proste barwienie? Najważniejsze funkcje



The proste barwienie jest szybką i prostą procedurą barwienia, w której stosuje się pojedynczy barwnik, dlatego nazywa się go prostym. Służy głównie do określenia morfologii i organizacji komórek obecnych w próbce.

Naturalnie komórki nie mają koloru, więc konieczne jest, aby były widoczne w jakiś sposób, gdy są obserwowane w mikroskopie.

Ważne jest podkreślenie, że barwniki stosowane w prostym barwieniu muszą być podstawowe z ładunkiem dodatnim (kationowym), aby mogły spontanicznie wiązać się ze ścianą komórkową i cytoplazmą.

Te struktury komórkowe są naładowane ujemnie. Dlatego barwnik, naładowany dodatnio, jest przyciągany do komórek i wiąże się z nimi spontanicznie. Zatem wszystkie komórki obecne w próbce są szybko zabarwione.

Barwniki stosowane w prostym barwieniu

Istnieje kilka podstawowych barwników, które można stosować w laboratorium mikrobiologicznym. Najczęściej używane to:

- Błękit metylenowy.

- Fiolet krystaliczny.

- Malachitowa zieleń.

- Podstawowa fuksja.

Wszystkie te barwniki działają dobrze w bakteriach, ponieważ mają dodatnio naładowane (kationowe) kolorowe jony (chromofory).

Czasy barwienia większości tych barwników są stosunkowo krótkie. Zazwyczaj wahają się od 30 sekund do 2 minut, w zależności od powinowactwa barwnika.

Ważne jest, aby pamiętać, że przed barwieniem próbki przez proste barwienie należy ją przedłużyć i przymocować do szkiełka (szkiełka); Rozszerzona i ustalona próbka nazywana jest rozmazem.

6 kroków do wykonania prostego barwienia

Krok 1

Umieść szkiełko na stojaku do barwienia i zastosuj żądany barwnik. Pozostaw odpowiedni czas.

Zwykle proste barwienie trwa kilka sekund lub kilka minut, w zależności od zastosowanej kolorystyki.

Obserwacja

W tym kroku ważne jest, aby nie przekroczyć zalecanego czasu dla użytego barwnika, ponieważ kryształy mogą tworzyć się na arkuszu, wytwarzając tzw. „Artefakty”, które zniekształcają morfologię komórek.

Krok 2

Ostrożnie umyć rozmaz slajdu wodą destylowaną z butelki lub również wodą z kranu, która płynie powoli, aż spływ stanie się przezroczysty. Zwykle zajmuje to od 5 do 10 sekund.

Obserwacja

Nie nakładaj strumienia wody bezpośrednio na rozmaz, aby zapobiec uszkodzeniu próbki przez siłę tego samego.

Jeśli nie masz wody destylowanej, możesz bez problemu użyć wody z kranu, ponieważ nie wpłynie to na wynik barwienia.

Krok 3

Wysuszyć szkiełko za pomocą chłonnych ręczników papierowych w jednym kierunku i bez pocierania. Upewnij się, że spód prowadnicy jest czysty.

Krok 4

Obserwuj poplamiony rozmaz w mikroskopie. Zacznij od najbardziej odległych celów, aby odpowiednio zlokalizować obszar, który chcesz bardziej szczegółowo obserwować. Zmień cel, aby zbliżyć się do próbki.

Obserwacja

Do korzystania z obiektywu o najwyższym powiększeniu (zwykle 100X) należy stosować olej immersyjny, ponieważ pomaga on lepszemu przenikaniu światła, a obraz jest ostrzejszy. Nie jest konieczne stosowanie szkiełka nakrywkowego.

Krok 5

Na koniec odrzuć wszystkie próbki w odpowiednim pojemniku, który jest odpowiednio oznaczony jako „biohazard”.

Referencje

  1. (2001). Zastosowania mikrobiologiczne: Laboratory Manual in General Microbiology (8 th red.). Firmy McGraw-Hill.
  2. Harisha, S. (2006). Wprowadzenie do praktycznej biotechnologii (1ul). Media zapory.
  3. Moyes, R. B., Reynolds, J. i Breakwell, D. P. (2009). Wstępne barwienie bakterii: proste plamy. Aktualne protokoły w mikrobiologii, (DOSTAWA 15), 1-5.
  4. Pommerville, J. (2013). Alcamo's Laboratory Fundamentals of Microbiology (10th). Jones & Bartlett Learning.
  5. Prescott, H. (2002). Ćwiczenia laboratoryjne w mikrobiologii (5 th). Firmy McGraw-Hill.
  6. Sumbali, G. i Mehrotra, R. (2009). Zasady mikrobiologii (1ul). Tata McGraw-Hill Education.