Podstawa, przygotowanie i zastosowanie wody peptonowej

The woda peptonada jest to nieselektywny płynny środek wzbogacający, stosowany głównie jako rozcieńczalnik do próbek żywności lub innych materiałów. Oznacza to z chemicznego punktu widzenia bardzo proste, zawiera pepton mięsa, chlorku sodu i wody.

Ma pewną wartość odżywczą, co pozwala wzbogacić próbkę. Jeśli są zniszczone bakterie, oznacza to, że jest w stanie naprawić żywotność. Jest szczególnie przydatny w odzyskiwaniu bakterii należących do rodziny Enterobacteriaceae.

W przypadku odzyskiwania Salmonellas zaleca się stosowanie buforowanego wariantu wody peptonada; Służy to jako środek wstępnego wzbogacania próbki, w tym przypadku zawiera inne pierwiastki, takie jak fosforan disodowy i fosforan dipotasowy.

Zazwyczaj woda peptonada jest przygotowywana w obojętnym pH, jednak istnieją inne warianty, w których konieczne jest, aby pH wynosiło 8,5 ± 0,2 (alkaliczne), ponieważ izolowane bakterie są alkalofilne, jak na przykład Vibrio cholerae.

Z drugiej strony, pożywka ta może być stosowana jako podłoże do testów fermentacji węglowodanów.

Indeks

• 1 Fundacja
• 2 Przygotowanie
  • 2.1 Przygotowanie domu (niekomercyjne)
  • 2.2 Przygotowanie przy użyciu komercyjnego medium
  • 2.3 Przygotowanie do testów fermentacyjnych
  • 2.4 Inne warianty wody peptonada
• 3 Użyj
  • 3.1 Próbki kału
  • 3.2 Próbki żywności
• 4 Kontrola jakości
• 5 Ograniczenia
• 6 referencji

Fundacja

Peptony dostarczają składników odżywczych wymaganych do rozwoju bakterii, zwłaszcza azotu i krótkołańcuchowych aminokwasów, podczas gdy chlorek sodu utrzymuje równowagę osmotyczną.

Ponadto podłoże umożliwia rozproszenie, homogenizację i naprawę komórek bakteryjnych, które zostały uszkodzone przez procesy przemysłowe..

Jako rozcieńczalnik jest idealny, skutecznie zastępując roztwór fizjologiczny (SSF) lub bufor fosforanowy (PBS).

Wzrost bakterii jest widoczny, obserwując jego zmętnienie.

Przygotowanie

Domowe przygotowanie (niekomercyjne)

Odważyć 1 g peptonu i 8,5 g chlorku sodu, rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Wartość pH należy dostosować do 7,0. W tym celu można użyć 1 N chlorku sodu.

Przygotowanie przy użyciu komercyjnego podłoża

Odważ 15 g odwodnionego podłoża i rozpuść w jednym litrze wody destylowanej. Homogenizuj mieszaninę. Jeśli to konieczne, mieszaninę gotuje się przez 1 minutę, aby wspomóc całkowite rozpuszczenie. W razie potrzeby podawać w 100 ml fiolkach lub w 10 ml probówkach. Autoklawować w 121 ° C przez 15 minut.

Schłodzić i używać lub przechowywać w lodówce. Końcowe pH pożywki wynosi 7,2 ± 0,2.

Barwa odwodnionego podłoża jest jasnobeżowa i przygotowana jest jasnobursztynowa.

Przygotowanie do testów fermentacyjnych

Do poprzedniego preparatu - przed sterylizacją - należy dodać węglowodan do końcowego stężenia 1% plus wskaźnik Andrade (fuksyna kwasowa) lub czerwień fenolowa (0,018 g / L). Dzwon Durham do obserwacji tworzenia się gazu należy umieścić na rurach.

Inne warianty wody peptonada

-Buforowana lub buforowana woda peptonowa

Zawiera enzymatyczny hydrolizat kazeiny, chlorek sodu, diwodorofosforan potasu i dodekahydrat wodorofosforanu sodu. Końcowe pH wynosi 7,0 ± 0,2.

Do przygotowania zważyć 20 g odwodnionego podłoża i rozpuścić w 1 litrze wody destylowanej. Pozostaw na około 5 minut. Ogrzewać przez 1 minutę aż do całkowitego rozpuszczenia.

W razie potrzeby wlać do odpowiednich butelek. Sterylizować w autoklawie w temperaturze 121 ° C przez 15 minut.

-Woda alkaliczna z dodatkiem peptonu

Odważ 25 g odwodnionego podłoża i rozpuść w 1 litrze wody. Postępuj jak opisano powyżej. PH waha się od 8,3 do 8,7.

Użyj

Inokulum wykonuje się przez bezpośrednie umieszczenie próbki.

Służy do rozcieńczania próbek, zwłaszcza gdy podejrzewa się, że mogą być uszkodzone bakterie. Zazwyczaj rozcieńczenia wynoszą 1:10 i 1: 100.

Inkubować przez 24 godziny w aerobiozie w temperaturze 35–37 ° C.

Próbki kału

W przypadku próbek stolca poszukujących Salmonelli zaleca się stosowanie buforowanej lub buforowanej wody jako pożywki do wstępnego wzbogacania..

Aby to zrobić, wykonaj następujące czynności:

Jeśli stolec się utworzy, weź 1 g próbki. Jeśli są płynne, należy pobrać 1 ml kału i zawiesić w probówce z 10 ml zbuforowanej wody peptonowanej. W przypadku wymazów z odbytnicy wyładuj materiał zawarty w waciku do probówki za pomocą zbuforowanej wody peptonowej.

We wszystkich przypadkach bardzo dobrze wymieszaj i homogenizuj próbkę.

Inkubować w 37 ° C przez 18 do 24 godzin. Następnie podhodować w bulionie wzbogacającym, takim jak bulion seleninowo-cystynowy lub bulion tetrationianowy w 37 ° C przez 18-24 godziny. Ostatecznie hodować na podłożach selektywnych dla Salmonella, takich jak między innymi agar SS, agar XLD, agar Hektoen..

Próbki żywności

Wodę peptonową stosuje się jako pożywkę wzbogacającą lub jako prosty rozcieńczalnik, ale jeśli poszukiwane są gatunki Salmonella, stosuje się ją jako pożywkę wstępnego wzbogacania, jak już opisano..

W żywności postępuj następująco:

W przypadku pokarmów stałych ważyć 25 g próbki, a w przypadku płynnych produktów spożywczych 25 ml. Umieścić tę porcję w kolbach zawierających 225 ml wody z dodatkiem peptonów. Wymieszać i homogenizować próbkę.

Jeśli podejrzewa się, że obciążenie mikrobiologiczne jest wysokie, można wykonać seryjne rozcieńczenia lub miejsca dziesiętne, aby ułatwić zliczanie jednostek tworzących kolonie (CFU).

Liczba rozcieńczeń zależy od rodzaju próbki i doświadczenia analitycznego.

Jeśli natomiast podejrzewa się, że obciążenie mikrobiologiczne jest bardzo niskie, nie ma potrzeby rozcieńczania. Następnie podhodowla się w selektywnych mediach.

W przypadku żywności z morza, takiej jak owoce morza, ryby, między innymi w poszukiwaniu Vibrio cholerae lub inne gatunki Vibrio, należy stosować wodę peptonową o pH 8,5 (alkaliczna woda peptonowana).

Kontrola jakości

Z każdej przygotowanej partii jedna do dwóch probówek powinna być inkubowana bez inokulacji przez 24 godziny w aerobiozie w temperaturze 37 ° C. Pod koniec czasu nie należy obserwować zmętnienia ani zmiany koloru.

Również dobrze znane szczepy kontrolne można wykorzystać do oceny ich skuteczności:

W tym celu można użyć następujących szczepów bakteryjnych: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

We wszystkich przypadkach oczekuje się zadowalającego rozwoju mikrobiologicznego, który obserwuje się przez zmętnienie podłoża.

Ograniczenia

-Odwodnione podłoże jest bardzo higroskopijne, dlatego powinno być trzymane z dala od wilgoci.

-Nośnika nie należy używać, jeśli zaobserwuje się pewien rodzaj pogorszenia.

-Odwodnioną pożywkę hodowlaną należy przechowywać w temperaturze 10 - 35 ° C

-Przygotowane podłoże powinno być przechowywane w lodówce (2-8 ° C).

Referencje

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B i Velázquez O. Techniki do analizy mikrobiologicznej żywności. 2009, 2. wyd. Wydział Chemii, UNAM. Meksyk Wersja dla administratora podręczników i dokumentów (AMyD) Wydziału Chemii, UNAM 1. Dostępny pod adresem: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratories Britania. Buforowana woda peptonada. 2015. Dostępny na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Woda peptonowa. Dostępne pod adresem: foodsafety.neogen.com
4. Laboratories Britania. Woda peptonowa. 2015. Dostępny na: britanialab.com
5. Merck Laboratories Buforowana woda peptonowa. Dostępne pod adresem: merckmillipore.com
6. Laboratoria Conda Pronadisa. Woda alkaliczna z dodatkiem peptonu. Dostępne pod adresem: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostyka mikrobiologiczna Bailey & Scott. 12 ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.