Nephelometria w tym, co składa się z aplikacji
The nefelometria polega na pomiarze promieniowania powodowanego przez cząstki (w roztworze lub w zawiesinie), mierząc tym samym moc promieniowania rozproszonego pod kątem innym niż kierunek promieniowania padającego.
Kiedy cząstka w zawieszeniu zostaje osiągnięta przez wiązkę światła, istnieje część światła, która jest odbijana, inna część jest pochłaniana, inna część jest kierowana, a reszta jest przekazywana. Dlatego, gdy światło uderza w przezroczyste medium, w którym znajduje się zawiesina cząstek stałych, zawiesina jest obserwowana mętna.
Indeks
- 1 Co to jest nefelometria??
- 1.1 Rozproszenie promieniowania przez cząstki w roztworze
- 1.2 Nefelometr
- 1.3 Odchylenia
- 1.4 Charakterystyki metrologiczne
- 2 Aplikacje
- 2.1 Wykrywanie kompleksów immunologicznych
- 2.2 Inne aplikacje
- 3 referencje
Co to jest nefelometria??
Rozproszenie promieniowania przez cząstki w roztworze
W chwili, gdy wiązka światła uderza w cząstki zawieszonej substancji, kierunek propagacji wiązki zmienia jej kierunek. Efekt ten zależy od następujących aspektów:
1. Wymiary cząstki (rozmiar i kształt).
2. Charakterystyka zawiesiny (stężenie).
3. Długość fali i intensywność światła.
4. Odległość padającego światła.
5. Kąt detekcji.
6. Współczynnik załamania medium.
Nefelometr
Nefelometr jest przyrządem służącym do pomiaru cząstek zawieszonych w próbce cieczy lub w gazie. Fotokomórka umieszczona pod kątem 90 ° w stosunku do źródła światła wykrywa promieniowanie cząstek obecnych w zawiesinie.
Ponadto światło odbite od cząstek w kierunku fotokomórki zależy od gęstości cząstek. Diagram 1 przedstawia podstawowe elementy składające się na nefelometr:
A. Źródło promieniowania
W nefelometrii niezwykle ważne jest posiadanie źródła promieniowania o wysokim strumieniu światła. Istnieją różne typy, począwszy od lamp ksenonowych i lamp rtęciowych, lamp halogenowych wolframowych, promieniowania laserowego, między innymi.
B. System monochromatyczny
System ten znajduje się między źródłem promieniowania a kuwetą, dzięki czemu unika się padania na kuwetę promieniowania o różnych długościach fali w porównaniu z pożądanym promieniowaniem.
W przeciwnym razie reakcje fluorescencyjne lub efekty ogrzewania w roztworze spowodowałyby odchylenia od pomiaru.
C. Odczyt kuwety
Jest to ogólnie pryzmatyczny lub cylindryczny pojemnik i może mieć różne rozmiary. W tym jest rozwiązanie w badaniu.
D. Detektor
Detektor znajduje się w określonej odległości (zwykle bardzo blisko zbiornika) i jest odpowiedzialny za wykrywanie promieniowania rozproszonego przez cząstki zawiesiny.
E. System czytania
Ogólnie jest to maszyna elektroniczna, która odbiera, konwertuje i przetwarza dane, które w tym przypadku są pomiarami uzyskanymi z przeprowadzonego badania.
Odchylenia
Każdy pomiar podlega procentowi błędu, który wynika głównie z:
Zanieczyszczone wiadra: w kuwetach dowolny środek zewnętrzny względem roztworu do badania, który znajduje się wewnątrz lub na zewnątrz kuwety, zmniejsza promieniowanie światła na drodze do detektora (uszkodzone kuwety, kurz przylegający do ścian kuwety).
Zakłócenia: obecność pewnego zanieczyszczenia mikrobiologicznego lub zmętnienia rozprasza energię promieniowania, zwiększając intensywność dyspersji.
Związki fluorescencyjne: są to związki, które po wzbudzeniu przez padające promieniowanie powodują błędne i wysokie odczyty gęstości dyspersji.
Konserwacja odczynników: nieodpowiednia temperatura systemu może spowodować niekorzystne warunki badania i pobudzić obecność mętnych odczynników lub osadów.
Wahania mocy elektrycznej: aby uniknąć sytuacji, w której padające promieniowanie jest źródłem błędu, zaleca się stabilizatory napięcia dla jednolitego promieniowania.
Charakterystyki metrologiczne
Ponieważ moc promieniowania wykrytego promieniowania jest wprost proporcjonalna do stężenia masy cząstek, badania nefelometryczne mają - w teorii - wyższą czułość metrologiczną niż inne podobne metody (takie jak turbidymetria).
Ponadto ta technika wymaga rozcieńczonych roztworów. Pozwala to zminimalizować zjawiska absorpcji i odbicia.
Aplikacje
Badania nefelometryczne zajmują bardzo ważną pozycję w laboratoriach klinicznych. Zakres zastosowań obejmuje oznaczanie immunoglobulin i białek ostrej fazy, dopełniacza i krzepnięcia.
Wykrywanie kompleksów immunologicznych
Gdy próbka biologiczna zawiera interesujący antygen, miesza się ją (w roztworze buforowym) z przeciwciałem, tworząc kompleks immunologiczny.
Nephelometria mierzy ilość światła rozproszonego przez reakcję antygen-przeciwciało (Ag-Ac) iw ten sposób wykrywa się kompleksy immunologiczne.
Badanie to można przeprowadzić dwiema metodami:
Nephelometria końcowego punktu:
Technikę tę można wykorzystać do analizy punktu końcowego, w którym przeciwciało badanej próbki biologicznej jest inkubowane przez 24 godziny.
Kompleks Ag-Ac mierzy się za pomocą nefelometru, a ilość rozproszonego światła porównuje się z tym samym pomiarem przeprowadzonym przed utworzeniem kompleksu.
Nefelometria kinetyczna
W tej metodzie szybkość tworzenia kompleksu jest monitorowana w sposób ciągły. Szybkość reakcji zależy od stężenia antygenu w próbce. Tutaj pomiary są wykonywane jako funkcja czasu, więc pierwszy pomiar jest wykonywany w czasie „zero” (t = 0).
Nefelometria kinetyczna jest najczęściej stosowaną techniką, ponieważ badanie można przeprowadzić w ciągu 1 godziny, w porównaniu do długiego okresu metody punktu końcowego. Współczynnik dyspersji mierzy się zaraz po dodaniu odczynnika.
Dlatego, dopóki odczynnik jest stały, ilość obecnego antygenu jest uważana za wprost proporcjonalną do szybkości zmian.
Inne aplikacje
Nephelometria jest zwykle stosowana w analizie jakości chemicznej wody, w celu określenia jasności i kontrolowania procesów jej obróbki.
Służy również do pomiaru zanieczyszczenia powietrza, w którym stężenie cząstek jest określane na podstawie dyspersji wytwarzanej w padającym świetle..
Referencje
- Britannica, E. (s.f.). Nephelometria i turbidymetria. Odzyskany z britannica.com
- Al-Saleh, M. (s.f.). Turbidymetria i nefelometria. Źródło: pdfs.semanticscholar.org
- Bangs Laboratories, Inc. (s.f.). Odzyskany z technochemical.com
- Morais, I. V. (2006). Analiza turbidymetryczna i nefelometryczna. Pobrane z repositorio.ucp.p
- Sasson, S. (2014). Zasady nefelometrii i turbidymetrii. Pobrane z notesonimmunology.files.wordpress.com
- Stanley, J. (2002). Podstawy immunologii i serologii. Albany, NY: Thompson Learning. Pobrane z books.google.co.ve
- Wikipedia. (s.f.). Nefelometria (medycyna). Źródło z en.wikipedia.org