Chromatogram, co to jest i rodzaje

The chromatogram jest dwuwymiarowym zapisem graficznym uzyskanym w ośrodku absorpcyjnym, który pokazuje rozdział substancji metodą chromatografii. Na chromatogramie tworzy się widzialny wzór, piki lub plamki, odzwierciedlające fizyczne rozdzielenie składników mieszaniny.

Dolna liczba to chromatogram z trzema pikami, A, B i C, trzech składników próbki rozdzielonych chromatograficznie. Zaobserwowano, że każdy z trzech pików ma inną wysokość i położenie w osi czasu chromatogramu.

Oś rzędnych lub Y rejestruje informacje o sile sygnału (w tym przypadku w miliwoltach mV). Reprezentuje rejestr, w zależności od detektora, pewnych właściwości fizycznych substancji lub oddzielnego składnika mieszaniny.

Wysokość piku jest proporcjonalna do stężenia oddzielonego składnika próbki w optymalnym systemie. Tak więc, na przykład, łatwo jest wyobrazić sobie, że składnik B jest w większej proporcji niż A i C.

Na osi odciętych lub X przedstawiono czas retencji składników próbki lub mieszaniny. Jest to czas, który upływa od wstrzyknięcia próbki aż do jej zatrzymania, różny dla każdej czystej substancji.

Indeks

• 1 Do czego służy chromatogram??
  • 1.1 Identyfikacja substancji
  • 1.2 Klasyfikacja czystości substancji
  • 1.3 Kwantyfikacja substancji
• 2 typy
  • 2.1 Chromatogramy na papierze lub cienkiej warstwie
  • 2.2 Chromatogramy generowane przez detektory
• 3 referencje

Do czego służy chromatogram??

Stanowi ostatni zapis całego procesu chromatografii. Z niego uzyskuje się parametry o znaczeniu analitycznym. Można to uzyskać jako plik elektroniczny, wydrukowany histogram lub wsparcie procesu; na przykład na papierze.

Oś Y jest generowana przez detektory sygnału lub intensywność odpowiedzi, takie jak spektrofotometry. Optymalna analiza czasu, charakterystyk uzyskanych pików lub plam jest niezbędna; rozmiar, lokalizacja, kolor, między innymi.

Analizy chromatogramów zazwyczaj wymagają stosowania kontroli lub standardów, substancji o identycznej tożsamości i znanego stężenia. Analiza tych kontroli pozwala ustalić przez porównanie z próbkami charakterystycznymi dla składników badanej próbki.

Na chromatogramie można obserwować i analizować, w jaki sposób przeprowadzono rozdzielanie składników mieszaniny. Jego optymalne badanie pozwala na identyfikację substancji, wykazanie jej czystości, ilościowe określenie ilości substancji obecnych w mieszaninie, między innymi.

Wyodrębnione informacje mogą mieć charakter jakościowy; na przykład, gdy substancje są identyfikowane i określana jest ich czystość. Informacje ilościowe odnoszą się do określenia liczby składników mieszaniny i stężenia wydzielonego analitu.

Identyfikacja substancji

Analizując wyniki chromatogramu, można zidentyfikować różne substancje przez porównanie czasów retencji ze znanymi substancjami. Można zaobserwować, czy badane substancje przemieszczają się w tej samej odległości, jeśli mają ten sam czas co znane substancje.

Na przykład chromatogram umożliwia wykrycie i zidentyfikowanie w moczu metabolitów leków dla sportowców, takich jak stymulanty i steroidy. Jest to ważne wsparcie w badaniu i badaniu niektórych metabolitów wytwarzanych przez zaburzenia genetyczne u noworodków.

Chromatogram ułatwia wykrywanie między innymi substancji chlorowcowanych węglowodorów obecnych w wodzie pitnej. Jest niezbędny w laboratoryjnej analizie kontroli jakości, ponieważ pozwala wykryć i zidentyfikować zanieczyszczenia obecne w różnych produktach.

Klasyfikacja czystości substancji

Na chromatogramie można rozróżnić substancje czyste i nieczyste. Czysta substancja wytworzy pojedynczy pik na chromatogramie; podczas gdy zanieczyszczona substancja wytworzy dwa lub więcej pików.

Odpowiednio dostosowując warunki, w których przeprowadza się chromatografię, można zapobiec powstaniu jednego piku przez dwie substancje.

Kwantyfikacja substancji

Analizując pole powierzchni pików chromatogramu, można obliczyć stężenie składników próbki.

Dlatego powierzchnia piku jest proporcjonalna do ilości substancji obecnej w próbce. Te dane ilościowe uzyskuje się w wysoce czułych systemach, takich jak na przykład generujące chromatografię gazową lub cieczową.

Typy

Jedna z klasyfikacji chromatogramów jest ściśle związana z różnymi typami chromatografii, które generują odpowiedni chromatogram.

W zależności od warunków wykonania detektorów, między innymi, chromatogram będzie się różnił pod względem zawartości i jakości.

Chromatogramy na papierze lub cienkiej warstwie

Chromatogram może być generowany bezpośrednio na papierze lub cienkiej warstwie, bezpośrednio pokazując rozkład lub rozkład składników próbki.

Jest bardzo przydatny do oddzielania i badania barwnych substancji, które mają naturalne pigmenty, takie jak chlorofil. Może być poddawany procesom rozwoju w przypadku, gdy substancje nie mają naturalnego koloru i jest przydatny do badań jakościowych.

Chromatogramy generowane przez detektory

Chromatogram można również uzyskać za pomocą detektora, który rejestruje odpowiedź, sygnał wyjściowy lub końcowy sygnał chromatografii. Jak wspomniano wcześniej, detektor ten jest zwykle spektrofotometrem, spektrometrem mas, automatycznymi sekwencerami, elektrochemikaliami, między innymi..

Chromatogramy generowane w kolumnach, zarówno gazów, jak i cieczy, jak również o wysokiej rozdzielczości w cienkiej warstwie, wykorzystują detektory.

W zależności od typu detektora, chromatogram może być sklasyfikowany jako różnicowy lub całkowy, w zależności od formy odpowiedzi detektora.

Chromatogram różnicowy

Detektor różnicowy w sposób ciągły mierzy sygnał odpowiedzi chromatogramu, podczas gdy detektory całkowite mierzą łącznie odpowiedni sygnał.

Chromatogram różnicowy jest chromatogramem uzyskanym przez detektor różnicowy. Wśród tych detektorów można wymienić na przykład spektrofotometry i detektory zmian przewodności elektrycznej.

Ten typ chromatogramu pokazał wynik oddzielenia anionów od próbki, wykrytej za pomocą fotometrii pośredniej. Również te same wyniki uzyskano dla badania jonów, na przykład z końcowym wykrywaniem za pomocą konduktometrii.

Górny wykres pokazuje przykład chromatogramu różnicowego otrzymanego przez automatyczne sekwencery DNA (kwas dezoksyrybonukleinowy). Wykres wyraźnie pokazuje szczyty czterech kolorów, jeden kolor dla każdej z zasad azotowych DNA.

Dzięki wsparciu skomputeryzowanego programu ułatwiona jest interpretacja sekwencji analizowanych zasad DNA, a także bardziej złożonych analitów..

Kompleksowy chromatogram

Chromatogram całkowy odpowiada temu uzyskanemu przez integralny detektor. Na tym chromatogramie potwierdza się wydajność pojedynczego badanego składnika. Nie uzyskuje się pików jak w dyferencjału.

W chromatogramie integralnym uzyskuje się rekord o kształcie opisanym jako krok. Ta forma jest częścią chromatogramu, która odpowiada ilości pojedynczej substancji opuszczającej kolumnę.

Referencje

1. Bhanot, D. (2013). Jak czytać Chromatogram? Źródło: lab-training.com
2. Carey, F. A. (2006). Organic Chemistry Sixth Edition. Mc Graw Hill
3. Chromatography Today. (2014). Co to jest Chromatogram? Źródło: chromatographytoday.com
4. Mathias, J. (2018). Przewodnik dla początkujących: jak interpretować wyniki chromatografii chromatograficznej z chromatografią masową. Źródło: innovatechlabs.com
5. Hiszpańskie Towarzystwo Chromatografii i Technik Pokrewnych. (2014). Chromatogram. Odzyskane z: secyta.es
6. Wikipedia. (2019). Chromatografia papieru. Źródło: wikipedia.org