Przygotowanie nośników kultury, na które składają się cele i etapy

The przygotowanie pożywek hodowlanych Jest to rutynowa metodologia stosowana w laboratoriach do wzrostu pożądanych mikroorganizmów. Pożywki hodowlane są stałymi, ciekłymi lub półstałymi preparatami, które zawierają wszystkie składniki odżywcze niezbędne do rozwoju populacji drobnoustrojów.

Ogólnie rzecz biorąc, środki do hodowli mikroorganizmów są bogate w białka i aminokwasy i zazwyczaj zawierają pewien składnik, który sprzyja wzrostowi organizmu, który chcesz badać, na przykład witamin, krwi, surowicy..

Nie ma ogólnej ani uniwersalnej pożywki hodowlanej, ponieważ jej skład zmienia się w zależności od potrzeb interesującego mikroorganizmu. Niektóre bakterie mogą rozwijać się w każdej pożywce hodowlanej, ale inne mają specjalne wymagania.

Indeks

• 1 Z czego się składa??
  • 1.1 Agar
  • 1.2 Płyny
  • 1.3 Wyciągi
  • 1.4 Peptony
  • 1.5 Amortyzatory
• 2 cele
• 3 Rodzaje mediów
  • 3.1 Na podstawie jego składu
  • 3.2 W oparciu o rodzaj mikroorganizmu
• 4 kroki
• 5 referencji

Z czego to się składa??

Mikroorganizmów, takich jak grzyby i bakterie, nie można badać indywidualnie z powodu ich niewielkich rozmiarów. Dlatego muszą być uprawiane w sztuczny sposób, który pozwala na znaczny wzrost populacji.

Na przykład, jeśli chcemy badać bakterie, musimy zapewnić im odpowiednie warunki, aby mogli się rozmnażać i tworzyć kolonię (co można zaobserwować gołym okiem).

Przygotowanie podłoży hodowlanych różni się znacznie w zależności od rodzaju mikroorganizmu, który chce się hodować. Przed przygotowaniem należy znać podstawowe potrzeby żywieniowe pracy.

Następnie zostaną opisane najczęstsze składniki używane w pożywkach kulturowych, aby mieć ogólne pojęcie o ich przygotowaniu:

Agar

Jest stosowany w uprawach jako środek żelujący i jest dodawany przy poszukiwaniu podłoża stałego lub półstałego. Pierwszym środkiem zestalającym stosowanym do przygotowania pożywek była żelatyna, ale w roku 1883 W. Hesse wprowadził agar do świata bakteriologii.

Głównym składnikiem agaru bakteriologicznego jest polisacharyd złożonych gałęzi pozyskiwanych z alg. Ten związek jest stosowany jako zagęszczacz do zwykłych produktów spożywczych, takich jak lody i dżemy.

Jest to bardzo cenny element w mikrobiologii z kilku powodów. Głównie dlatego, że mikroorganizmy nie mogą go degradować, upłynniają się w temperaturze 100 ° C i pozostają w stanie ciekłym do osiągnięcia 45 ° C lub mniej.

W przypadku, gdy chcesz przygotować podłoże stałe, stężenie agaru powinno wynosić około 1,5%, a półstałe powinno być przygotowane od 0,3 do 0,5%.

Płyny

Uprawa organizmów chorobotwórczych wymaga płynów ustrojowych, aby mogły się rozwijać tak, jak w naturalnym środowisku. Z tego powodu dodaje się krew pełną lub defibrylowaną. Płyn jest pobierany od zdrowego zwierzęcia i po sterylizacji jest dodawany do pożywki hodowlanej.

Wyciągi

Otrzymuje się je z różnych części zwierzęcych (takich jak mięso lub wątroba) lub warzyw (nasiona) i przetwarza w celu uzyskania stałego koncentratu w postaci pasty lub proszku. Najczęstsze są drożdże, słód i mięso.

Peptony

Te związki organiczne otrzymuje się przez enzymatyczną lub chemiczną hydrolizę tkanek zwierzęcych lub roślinnych. Celem jest dodanie zawartości bogatej w aminokwasy, które są podstawowymi jednostkami białek.

Amortyzatory

Bufory lub systemy buforowe zapobiegają nagłym zmianom pH i pomagają utrzymać optymalny zakres tolerowany przez organizm.

Większość organizmów może rozwijać się prawidłowo przy pH 7, chociaż niektóre bakterie preferują media alkaliczne. Istnieją jednak bakterie, które są odporne na zmiany pH między wartościami 6 i 9.

W gatunkach wrażliwych na pH uszkodzenie nie jest powodowane przez nadmierną ilość jonów wodorowych lub hydroksylowych, ale przez wzrost słabych kwasów lub zasad, które mogą przenikać do komórki.

Dodawane są również wskaźniki, które monitorują pH i unikają odchyleń spowodowanych fermentacją lub innymi procesami.

Cele

Głównym celem przy przygotowywaniu pożywki hodowlanej jest dodanie wszystkich niezbędnych składników, aby umożliwić pomyślny rozwój organizmu, który chce być izolowany. Aby uzyskać pożądaną pożywkę, należy zidentyfikować najskuteczniejszą kombinację składników i składników odżywczych.

Zarówno przygotowanie, jak i przechowywanie medium są kluczowe dla zapewnienia pomyślnego wzrostu, ponieważ te etapy zależą od składu środowiska i dostępności składników odżywczych.

Należy wziąć pod uwagę, że uprawa mikroorganizmów jest zadaniem, na które wpływa kilka czynników zewnętrznych względem pożywki hodowlanej, takich jak intensywność otrzymanego światła, temperatura i poziom kwasowości lub zasadowości podłoża. Dlatego każda z tych zmiennych musi być brana pod uwagę.

Rodzaje mediów

Na podstawie jego składu

Na podstawie jego składu istnieją trzy główne typy upraw: naturalne lub empiryczne, półsyntetyczne i określone środki syntetyczne lub chemiczne.

Środowisko naturalne

W środowisku naturalnym dokładny skład nie jest znany. Należą do nich takie składniki jak mleko, rozcieńczona krew, soki warzywne, ekstrakty i napary mięsne i peptonowe. Ze względów ekonomicznych często dodaje się składniki o niskich kosztach, takie jak ekstrakt sojowy, serwatka, melasa itp..

Media półsyntetyczne

Nazywa się to medium półsyntetycznym, jeśli jego skład jest częściowo znany. Każde podłoże zawierające agar staje się podłożem półsyntetycznym.

Wśród nich mamy między innymi agar z papką dekstrozową, agar czapek-dox, agar owsiany, agar z peptonem..

Syntetyczne lub chemiczne podłoże zdefiniowane

W tym przypadku skład medium - pod względem ilości węgla, azotu, siarki, fosforu i wszelkich innych źródeł czynników wzrostu - jest w pełni znany. Jest to bardzo przydatne, jeśli chcesz uzyskać powtarzalne wyniki dla innych badaczy.

W przypadku tak zwanych „mikroorganizmów o specjalnych wymaganiach dotyczących wzrostu” konieczne jest dodanie niezbędnych składników. Przykładem tego typu są Lactobacillus.

Na podstawie rodzaju mikroorganizmu

Podobnie istnieje inna klasyfikacja pożywek hodowlanych w oparciu o typ mikroorganizmu, który może w nim rosnąć. Zgodnie z tą zasadą mamy następujące ogólne sposoby wzbogacania, selektywności i różnicowania. Każdy z nich jest opisany poniżej:

Ogólne środki

Przyznają one rozwój wielu różnych mikroorganizmów. Jeśli jakikolwiek organizm potrzebuje specjalnych warunków do wzrostu, nie będzie w stanie skutecznie się rozwijać w tego typu uprawach.

Środki wzbogacające

Środki wzbogacania sprzyjają rozwojowi pewnego rodzaju mikroorganizmów, ale nie dodano substancji zapobiegającej wzrostowi innych drobnoustrojów..

Media selektywne

Szukają specyficznego wzrostu mikroorganizmu, nazywają go między innymi grzybami, bakteriami, pierwotniakami. Aby to zrobić, hamują rozwój innych.

Aby osiągnąć ten cel, można dodać śmiertelne związki chemiczne dla dużej grupy mikroorganizmów i nieszkodliwe dla organizmu będącego przedmiotem zainteresowania lub dodając źródła energii, które mogą być zasymilowane tylko przez poszukiwany mikrob..

Media selektywne stosuje się podczas pobierania próbek medycznych w celu hodowania patogennego mikroorganizmu. W tym przypadku konieczne jest sprzyjanie wzrostowi patogenu i hamowanie rozwoju normalnej flory bakteryjnej pacjenta.

Agar z siarczynem bizmutu, na przykład, nie pozwala na wzrost bakterii gram-dodatnich i dużej liczby bakterii występujących w jamie żołądkowo-jelitowej. Dlatego używa się go do uprawy bakterii Gram-ujemnych, które powodują dur brzuszny, Salmonella typhi w próbkach kału.

Media różnicowe

Ten typ wykorzystuje pewną cechę diagnostyczną organizmu będącego przedmiotem zainteresowania (na przykład właściwości w jego metabolizmie), aby móc je zidentyfikować przeciwko innemu gatunkowi, który rośnie w tym samym środowisku.

Zarówno media różnicowe, jak i pożywki selektywne są bardzo przydatne w dziedzinie mikrobiologii klinicznej i zdrowia publicznego, ponieważ dyscypliny te muszą wykrywać obecność określonych mikroorganizmów związanych ze złymi warunkami higienicznymi lub warunkami..

Do uprawy można dodawać substancje wskaźnikowe, które nadają pożądanej kolonii charakterystyczne cechy. Na przykład dodaje się błękit agarowo-eozynowo-metylenowy (w skrócie EMB) i agar MacConkeya z laktozą i wskaźnikiem pH.

Tak więc, gdy kolonia jest rozwijana w tych mediach ze zdolnością do fermentacji laktozy i wytwarzania aldehydów, można je zaobserwować w specjalnym kolorze.

Kroki

Obecnie pożywki hodowlane można kupić w postaci liofilizowanej. Dlatego preparat jest ułatwiony i tylko produkt jest ponownie uwodniony. Zawartość należy zważyć (biorąc pod uwagę ostateczną ilość, którą chcesz przygotować) i rozpuścić w wodzie destylowanej zgodnie ze wszystkimi wskazaniami produktu.

Zawartość płynnych mediów należy podzielić na żądane pojemniki (szalki Petriego, probówki itp.) W celu późniejszej sterylizacji. Aby rozprowadzić podłoże stałe, konieczne jest stopienie go za pomocą kuchenki mikrofalowej lub poddanie materiału kąpieli wodnej. PH pożywki musi być dostosowane.

Zwykle agar stosuje się w probówkach testowych lub na szalkach Petriego. Jeśli agar zestala się w pozycji nachylonej, z odpowiednim kątem, tak że końcowa krawędź końcowa jest ukośna, układ ten jest znany jako pik fletowy lub rury nachylone. Gdy agar krzepnie w pozycji całkowicie pionowej, nazywa się to „głębokim”.

Po sterylizacji mediów - przy użyciu autoklawu - pozostawia się je do ostygnięcia. Muszą być obsługiwane w środowisku wolnym od mikroorganizmów, najczęściej jest to praca z zapaloną zapalniczką, która zapewnia aseptyczne środowisko w pobliżu.

Referencje

1. Celis, J. E. (2006). Biologia komórki: podręcznik laboratoryjny (Tom 2). Elsevier.
2. Finegold, S.M., Bailey, W.R., Baron, E.J., Fineglod, S.M. i Scott, E.G. (1991). Bailey Scott: diagnoza mikrobiologiczna. Pan American Medical.
3. Olivas, E. (2004). Podręcznik praktyk mikrobiologii I i II oraz Parazytologia. Autonomiczny Uniwersytet Ciudad Juárez.
4. Schlegel, H. G. i Zaborosch, C. (1993). Ogólna mikrobiologia. Cambridge University Press.
5. Tortora, G. J., Funke, B. R. i Case, C. L. (2007). Wprowadzenie do mikrobiologii. Ed. Panamericana Medical.