Podstawa, przygotowanie i wykorzystanie pół SIM



The pół SIM Jest to półstały i różnicowy agar, specjalnie zaprojektowany, aby pomóc w identyfikacji niektórych bakterii, głównie z rodziny Enterobacteriaceae. Składa się z tryptyny, peptonu, siarczanu żelaza, siarczanu amonu, tiosiarczanu sodu i agaru.

Medium to umożliwia wykonanie trzech ważnych testów: produkcji siarkowodoru (H2S), tworzenie indolu i ruchliwość, stąd skrót SIM. Ze względu na swoją wielką przydatność nie może zabraknąć w laboratorium bakteriologicznym.

W przeciwieństwie do innych mediów, musi to być ciało półstałe, tak aby zdolność poruszania się niektórych bakterii była wykrywalna. W tym sensie test ten sprawdza się bardzo dobrze w przypadku Enterobacteriaceae, ale nie w Gram-ujemnych, niefermentujących pałeczkach, gdzie preferuje się stosowanie innych metod, takich jak na przykład oczekująca kropla.

Medium SIM pozwala odróżnić określone właściwości, które charakteryzują niektóre bakterie w stosunku do innych. Na przykład Escherichia coli wyróżnia się jako H2S (-), Indol (+) i ruchliwość (+), podczas Proteus mirabilis to jest H2S (+), indol (-), ruchliwość (+).

Indeks

  • 1 Fundacja
    • 1.1 Źródło zasilania
    • 1.2 Produkcja siarkowodoru
    • 1.3 Tworzenie się indolu
    • 1.4 Ruchliwość
  • 2 Przygotowanie
    • 2.1 Połowa karty SIM
    • 2.2 Odczynnik Kovaca
    • 2.3 Odczynnik Erlicha
  • 3 zastosowania
    • 3.1 Nasiona
  • 4 Kontrola jakości
  • 5 Ograniczenia
  • 6 referencji

Fundacja

Jest to podłoże hodowlane uważane za różnicowe, ponieważ jego użycie pozwala odróżnić mikroorganizmy zdolne do wytwarzania siarkowodoru od mikroorganizmów; Podkreśla również te, które tworzą indol z tryptofanu tych, które go nie tworzą, i ostatecznie odróżnia ruchliwość od nieruchomych bakterii.

Źródło zasilania

Jak każda pożywka hodowlana zawiera elementy, które dostarczają niezbędnych składników odżywczych, dzięki czemu mogą rozwijać się nie wymagające mikroorganizmów. Elementy te są reprezentowane przez peptony i tripteinę.

Rozwój mikroorganizmu w środowisku jest niezbędny, aby móc obserwować obecność lub brak cech ocenianych przez to podłoże.

Produkcja siarkowodoru

Litera S akronimu SIM odnosi się do produkcji siarkowodoru (H2S). Bakterie zdolne do tworzenia siarkowodoru przyjmą siarkę tiosiarczanu sodu.

Po utworzeniu H2S - gazy bezbarwne - reaguje z solą żelaza obecną w podłożu, tworząc wyraźnie widoczny siarczek żelazawy (czarny osad). Bakterie, które nie tworzą H2S, pozostaw środek oryginalnego koloru (beżowy).

Obecność czarnego osadu może utrudniać interpretację ruchliwości. Wiadomo jednak, że większość enterobakterii produkujących H2S mają ruchliwość dodatnią, taką jak Salmonella, Proteus i Citrobacter. Ponadto czarny osad pokrywający prawie całe podłoże sugeruje pozytywną ruchliwość.

Trening indolowy

Druga litera akronimu SIM to „I”, która reprezentuje tworzenie indolu.

W tym sensie tripteína, oprócz tego, że jest źródłem składników odżywczych, spełnia inną podstawową funkcję. Ten pepton jest bogaty w aminokwas zwany tryptofanem, dlatego może pokazywać bakterie wytwarzające tryptofanazę.

Enzym ten jest odpowiedzialny za obcinanie aminokwasu tryptofanu, co powoduje powstawanie indolu (bezbarwna substancja), kwasu pirogronowego i amonu..

Dlatego, aby zademonstrować tę reakcję, konieczne jest dodanie substancji ujawniającej (odczynnik Ehrlicha lub odczynnik Kovaca). Albo reaguje z indolem, tworząc na powierzchni agaru substancję czerwono-fuksyjną w kształcie pierścienia. Jeśli pojawi się pierścień fuksji, test indolu jest interpretowany jako pozytywny.

Bakterie, które nie mają tego enzymu, nie będą tworzyć pierścienia i będą interpretowane jako negatywny test indolowy.

Należy podkreślić, że test indolu powinien być ostatnim, który zostanie zinterpretowany, ponieważ po dodaniu odczynnika medium staje się mętne, co utrudnia wizualizację ruchliwości.

Ruchliwość

Wreszcie litera „M” słowa SIM oznacza ruchliwość. Aby móc ocenić ruchliwość, to medium jest strategicznie półstałe, ponieważ ta cecha jest niezbędna, aby móc zaobserwować, czy istnieje ruch bakteryjny. Bakterie, które mają wici, to te, które dają ten pozytywny wynik.

Pozytywny wynik testu będzie widoczny w przypadku zaobserwowania zmętnienia, zarówno w początkowym inokulum, jak i wokół niego. Podczas gdy bakterie niemobilne rozwijają się tylko na początkowej ścieżce inokulum.

Przygotowanie

Połowa SIM

Odważyć 30 g odwodnionej pożywki i rozpuścić w jednym litrze wody destylowanej. Mieszaninę pozostawia się na 5 minut, a następnie ogrzewa do wrzenia, często mieszając, aż do całkowitego rozpuszczenia..

Rozprowadzić mieszaninę w probówkach z bawełnianą pokrywką i autoklawować w 121 ° C przez 15 minut. Wyjmij statyw na probówki z autoklawu i pozwól mu zestalić się w pozycji pionowej, tak aby medium miało kształt bloku..

Do przechowywania jest przechowywany w lodówce do momentu użycia. Przygotowane podłoże musi mieć końcowe pH 7,3 ± 0,2.

W momencie zaszczepienia podłoża musi być w temperaturze pokojowej. Kolor medium jest beżowy.

Odczynnik Kovaca

Zmierzyć 150 ml alkoholu amylowego lub izoamylowego lub butylowego. (Użyj jednego z trzech wymienionych).

Rozpuścić 10 g p-dimetyloaminobenzaldehydu. Następnie powoli dodać 50 ml stężonego kwasu solnego.

Odczynnik gotowy do użycia jest bezbarwny lub jasnożółty. Powinien być przechowywany w bursztynowej butelce i przechowywany w lodówce. Nie używać, jeśli ma ciemnobrązowy kolor; oznacza to, że jest uszkodzony. Ten odczynnik jest preferowany w przypadku enterobakterii.

Odczynnik Erlicha

Odważyć 2 g p-dimetyloaminobenzaldehydu i rozpuścić w 190 ml absolutnego alkoholu etylowego i powoli wymieszać z 40 ml stężonego kwasu solnego. Odczynnik Kovaca należy przechowywać w ten sam sposób. Odczynnik Ehrlicha jest stosowany bardziej dla bakterii niefermentujących i beztlenowych.

Używa

Medium SIM jest wysoko wykorzystywane w laboratoriach bakteriologicznych. Ma to tę zaletę, że w tej samej probówce można zaobserwować trzy istotne cechy w identyfikacji Enterobacteriaceae.

Zasiane

Prawidłowy sposób posiewu tego podłoża polega na użyciu igły, z której pobierana jest część czystej kolonii i umieszczana pionowo na środku podłoża. Należy wykonać pojedynczy ciąg. Nakłucie nie powinno sięgać dna rury, właściwą rzeczą jest pokrycie tylko dwóch trzecich głębokości.

Nie zaleca się powtarzania inokulum, ponieważ może to prowadzić do fałszywych interpretacji ruchliwości dodatniej. Zaszczepioną pożywkę inkubuje się w aerobiozie w 37 ° C przez 24 godziny.

Podsumował czas, w którym zaobserwowano, czy nastąpiło, czy nie, wytwarzanie H2S i ruchliwość czyta się. W końcu ujawnia się indol, dodając 3 do 4 kropli odczynnika Ehrlicha lub Kovaca, miesza się delikatnie i interpretuje.

Kontrola jakości

Jako kontrolę jałowości jedną lub dwie probówki inkubuje się bez inokulacji w piecu w 37 ° C przez 24 godziny. Oczekuje się, że po tym czasie nie będzie wzrostu lub zmiany koloru.

Jako kontrola jakości można stosować certyfikowane znane szczepy, takie jak: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Oczekiwane wyniki to: Escherichia coli H2S negatywna, indolowa i pozytywna ruchliwość, Enterobacter aerogenes tylko pozytywna ruchliwość, Salmonella typhimurium H2S i ruchliwość dodatnia, z indolem ujemnym. Proteus vulgaris wszystkie pozytywne, chociaż Klebsiella pneumoniae i Shigella sonnei wszystkie negatywne.

Ograniczenia

-Niektóre szczepy Morganella morganii, wśród innych szczepów może wytwarzać brązowawy pigment w tym podłożu z powodu wytwarzania melaniny, nie należy tego mylić z osadem siarczku żelazawego. U niedoświadczonych specjalistów ta sytuacja może generować fałszywe trafienia w interpretacji testu H2S.

-Ścisłe bakterie tlenowe będą rosły tylko na powierzchni rurki, co utrudnia interpretację ruchliwości.

Referencje

  1. Laboratoria BD Medium BBL SIM. 2008. Dostępny na: bd.com
  2. Neogen Laboratories Medium SIM. Dostępne na: artykuły żywnościowe
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. Medium SIM. 2009. Dostępny pod adresem: http://f-soria.es
  4. Laboratorium Brizuela-Lab Medium SIM. Dostępne pod adresem: .brizuela-lab.com
  5. Laboratories Britania. Medium SIM. 2015. Dostępny na stronie: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostyka mikrobiologiczna. 5th ed. Od redakcji Panamericana S.A. Argentyna.